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背景与目的免疫系统对“自我”和“非我”识别及其相关分子机制是当前免疫学研究的热点问题之一。现在人们普遍认为先天免疫系统通过模式识别受体（如Toll样受体）来识别损伤（或危险）和病原体相关分子模式（分别称为DAMP和PAMP）。然而,PAMP和DAMP的应答及调节方式如何尚不清楚。近年来的研究揭示唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素（Siglecs）家族的成员基于唾液酸糖苷的模式识别作用可以减弱天然免疫反应,尤其是CD24-Siglec 10/G相互作用选择性地抑制宿主对DAMP而不是PAMP的反应。巨噬细胞作为机体重要的免疫细胞参与免疫识别、免疫应答和免疫调节等多种免疫反应过程,然而CD24-Siglec G信号通路在巨噬细胞中的作用尚未确定。本课题旨在探讨巨噬细胞中CD24分子和Siglec G分子的表达、CD24-和Siglec G对DAMPs和PAMPs的反应以及在炎症反应中的调节作用。方法与结果本研究课题分为三个部分:第一部分探究CD24-Siglec G信号通路对小鼠腹腔巨噬细胞的调控作用,主要用到以下实验方法:提取并纯化野生型（WT）、CD24基因敲除(CD24-/-)小鼠和Siglec G基因敲除(Siglec G-/-)小鼠的腹腔巨噬细胞,应用DAMPs中的高迁移率族蛋白Bl（HMGB1）和PAMPs中的脂多糖（LPS）分别刺激24 h,Real-time PCR检测腹腔巨噬细胞中CD24和Siglec G的基因表达水平,流式细胞术检测腹腔巨噬细胞中CD24和Siglec G表达的相关性,ELISA方法检测WT、CD24-/-和Siglec G-/-小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-6的表达水平。结果显示:HMGB1能够使腹腔巨噬细胞中CD24和Siglec G的表达明显升高,并且CD24和Siglec G的表达具有相关性。而LPS作用腹腔巨噬细胞后CD24和Siglec G的表达没有明显改变。同时发现,HMGB1作用于CD24-/-和Siglec G-/-小鼠的腹腔巨噬细胞后,TNF-α和IL-6的分泌明显升高,而LPS刺激后炎症因子的分泌没有明显改变。第二部分探究CD24-Siglec G信号通路对小鼠肝内巨噬细胞的调控作用,主要用到以下实验方法:应用Percoll密度离心法提取并纯化WT小鼠肝内巨噬细胞,HMGB1,LPS和Poly I:C分别刺激24 h,Real-time PCR检测肝内巨噬细胞中CD24和Siglec G的基因表达水平,流式细胞术检测肝内巨噬细胞中CD24和Siglec G表达的相关性。ELISA方法检测WT、CD24-/-和Siglec G-/-小鼠肝内巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-6的分泌情况。构建小鼠急性肝损伤模型,应用H&E染色、免疫荧光染色和蛋白印记杂交的方法检测WT小鼠肝损伤程度,流式细胞术检测WT小鼠肝损伤后巨噬细胞数量和比例变化,H&E染色、肝功能指标测定和Real-time PCR方法评估WT、CD24-/-和Siglec G-/-小鼠的肝损伤程度差异。结果显示:HMGB1能够使肝内巨噬细胞中CD24和Siglec G的表达明显升高,而LPS和PolyI:C作用后CD24和Siglec G的表达没有改变,并且肝内巨噬细胞中CD24和Siglec G的表达具有相关性。HMGB1作用于CD24-/-和Siglec G-/-小鼠的肝内巨噬细胞后,TNF-α和IL-6的分泌明显增加,而LPS刺激后炎症因子的分泌没有明显改变。WT小鼠急性肝损伤后,会释放大量HMGB1,且肝内巨噬细胞的数量明显增多。同时发现小鼠急性肝损伤后,与WT小鼠相比,CD24-/-和Siglec G-/-小鼠的肝损伤程度更严重。第三部分探究CD24-Siglec G信号通路调节炎症反应的分子机制,主要用到以下实验方法:提取并纯化WT和Siglec G-/-小鼠的腹腔巨噬细胞和肝内巨噬细胞,蛋白印记杂交技术检测两种巨噬细胞中SHP-1和SHP-2的蛋白表达水平。结果显示:在两种类型的巨噬细胞中,当用HMGB1刺激不同时间后,WT小鼠的巨噬细胞中SHP-1的蛋白表达水平随刺激时间延长而逐渐增多,并且高于Siglec G-/-小鼠,SHP-2在两种基因型小鼠巨噬细胞中的表达无明显变化。结论腹腔巨噬细胞和肝内巨噬细胞中表达的CD24和Siglec G可特异识别HMGB1,而不能识别LPS,且CD24与Siglec G的表达呈现相关性。此外,相较于WT小鼠,CD24-/-与Siglecg G-/-小鼠的腹腔巨噬细胞和肝内巨噬细胞相关炎症因子的分泌量显著升高。在Con A急性肝炎模型中,同样可以观察到类似的炎症因子分泌特征,并且炎症因子的分泌与小鼠急性肝损伤后肝内巨噬细胞数量增加和伴有严重的肝功能障碍有关,且CD24-Siglec G通路主要是通过激活SHP-1来发挥其免疫抑制作用。