植酸酶是催化植酸及植酸盐水解成肌醇和磷酸及磷酸盐的一类酶,能释放被植酸络合的矿物元素和一些蛋白质。植酸酶可以解除植酸的抗营养作用,在饲料、食品、医药等领域有着广泛的应用前景。本实验成功筛选出了一株高产、稳定的产植酸酶菌株,初步鉴定为黑曲霉,并命名为A.nigerFZ56。摸索了液体发酵产酶的最佳条件,获得其最适发酵培养基（w/w）:可溶性淀粉4%,NH₄NO₃0.08%,KCl0.05%,MgSO₄·H₂O0.05%,FeSO₄·7H₂O0.003%,MnSO₄·7H₂O0.003%,水1 L。培养基起始pH值6.0,种龄为36 h,接种量为5%,装液量为50/500 mL,在30℃、220 r/min下培养84 h,酶活可达到221U/mL。从A.niger FZ56液态发酵产物中提取植酸酶。粗酶液经硫酸铵沉淀、凝胶过滤、离子交换层析纯化后,提纯倍数可达10.3,回收率为25.2%。酶学性质研究表明,植酸酶最适作用温度为55℃、最适作用pH为6.0,米氏常数Km为0.14mmol/L。通过PCR从A.nigerFZ56基因组中扩增出植酸酶phy A基因,将其转入毕赤酵母GS-115中,整合到酵母染色体上并进行诱导表达,并对表达条件进行了优化。再用蛋白质分离纯化技术纯化重组酶并进行SDS-PAGE鉴定,蛋白质分子量约为61kDa,而植酸酶基因产物的理论值为50kDa,说明有一定程度的糖基化。最后测定了表达产物的酶学性质,结果表明表达产物的最适pH为6.0,最适温度为55℃,与前面结果一致,说明植酸酶在毕赤酵母GS-115得到预期的表达。