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目的:通过观察ALI时肺组织内TREM-1的表达变化以及TREM-1对巨噬细胞自噬的影响,探讨TREM-1在急性肺损伤中的作用及其放大炎症反应的机制。材料与方法:(1)以昆明小鼠作为研究对象,分为正常组、ALI组。采用腹腔注射LPS 10mg/kg建立ALI模型。采用Buxco检测方法观察两组呼吸功能,包括呼吸频率、气道阻力、潮气量、肺顺应性等指标。HE染色方法观察小鼠肺组织病理改变,并分析病理评分。采用实时荧光定量PCR检测TREM-1在肺组织中的表达,Western blot检测肺组织中TREM-1的蛋白表达。(2)选择对数生长期的巨噬细胞(RAW264.7细胞株)为研究对象,给予不同浓度的LPS(0、50、100、200、400、1000ng/mL)处理 24h;选用 LPS 1000ng/mL 处理不同的时间(0、6、12、24、36h)。Western blot检测肺组织中TREM-1的蛋白表达。选择对数生长期的巨噬细胞(RAW264.7细胞株),分为对照组、LPS组、TREM-1拮抗剂组、TREM-1激动剂组、TREM-1拮抗剂+LPS组、TREM-1激动剂+LPS组。TREM-1激动剂/拮抗剂提前加入六孔板中过夜,种植对数生长期巨噬细胞,2h贴壁后加入1000ng/mL的LPS处理24h。Western blot技术测定自噬标志蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ及自噬相关基因ATG7的蛋白表达,Real-time PCR测定自噬相关基因(ATG5、7、12)及自噬标志蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的mRNA的表达。细胞免疫荧光染色检测RAW264.7巨噬细胞LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达状态。结果:1.ALI时肺组织TREM-1的表达变化LPS处理6h后,Buxco检测结果显示,与正常组小鼠相比,ALI组小鼠的呼吸频率、潮气量、肺顺应性均降低,而气道阻力升高。在光镜下观察HE染色图片,得到ALI组的肺组织水肿、肺间隔增厚、炎症细胞浸润。Real-time PCR与Western blot检测结果表明,与正常组相比,ALI组小鼠肺组织TREM-1的表达明显升高。2.TREM-1对巨噬细胞自噬的影响细胞水平中,LPS可诱导巨噬细胞表达TREM-1,且呈时间与剂量依赖性。Western blot检测结果表明,与对照组相比,10OOng/mLLPS处理巨噬细胞24h,TREM-1的表达增加明显。Western blot检测TREM-1与细胞自噬之间关系结果表明,与对照组相比,TREM-1激动剂+LPS组的自噬标志蛋白LC3 Ⅱ/Ⅰ、自噬相关基因ATG7蛋白表达降低。Real-time PCR检测结果显示,与LPS组相比,TREM-1激动剂+LPS组的自噬相关基因ATG5、ATG7、ATG12的mRNA表达降低;而TREM-1拮抗剂+LPS组自噬相关基因ATG5、ATG7、ATG12的mRNA表达增加。细胞免疫荧光染色检测结果显示,在对照组巨噬细胞LC3 Ⅱ/Ⅰ呈现强阳性表达,LPS组、单纯TREM-1激动剂组、TREM-1激动剂+LPS组中巨噬细胞LC3 Ⅱ/Ⅰ 阳性表达荧光降低,且以TREM-1激动剂+LPS组降低最明显。结论:1.LPS可诱导ALI;ALI小鼠肺组织TREM-1的mRNA和蛋白水平表达升高。2.TREM-1可抑制巨噬细胞自噬。