miRNA-17对血管平滑肌细胞增殖的调控机制研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hether_yan
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目的:  观察miRNA-17对人血管平滑肌细胞的增殖作用,以及可能的调控机制研究。  方法:  人血管平滑肌细胞培养;实验选用3-5代细胞,待细胞长至70%融合时,将培养的VSMC通过lipo2000转染miRNA-17 mimics(实验组)及miRNA-17inhibitor(抑制组),或不做转染处理(空白对照组)。通过标记的FAM的表达估计转染效率;用real-time PCR检测各组细胞miRNA-17的表达水平;用CCK-8法分别检测各组细胞的增殖情况,利用western blot法检测转染后各组E2F1蛋白及增殖相关蛋白PCNA的表达情况。  实验结果:  荧光显微镜观察显示,6h后细胞的转染效率85%以上;real-time PCR结果显示,实验组VSMC的miRNA-17表达水平明显高于抑制组(均P<0.01);细胞增殖检测结果显示,实验组的细胞增殖率明显高于抑制组和空白组(P<0.01);western blot结果提示实验组E2F1以及PCNA的表达明显高于抑制组和空白组(P<0.05)。  结论:  1.上调VSMC内miRNA-17的表达可以促进VSMC的增殖。  2.miRNA-17通路促进Rb蛋白的磷酸化释放E2F1进而轴促进VSMC增殖。
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