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猪卵母细胞体外成熟、孤雌激活及胚胎体外培养是克隆猪等胚胎工程的重要组成部分。为了给克隆猪的研制提供科学的技术参数,本研究开展了多种培养液对猪卵母细胞体外成熟影响的研究,探索了不同激活参数及联合化学激活对猪成熟卵母细胞孤雌激活的效果,以及不同培养基和分别添加生长因子EGF和bFGF对猪孤雌胚发育的影响。研究得出如下结果:分别用添加了血清和无血清的NCSU-23培养猪卵母细胞,其成熟率(73.31±3.03% vs 68.83±4.60%)无显著性差异(P>0.05);尝试用一种新的培养基PZM来培养猪卵母细胞,与常用培养基NCSU-23和TCM-199对比,成熟率(56.09±2.12%vs 72.43±3.84% vs67.91±5.11%)差异显著(P<0.05),而NCSU-23和TCM-199之间,差异不显著(P>0.05)。体外成熟卵丘-卵母细胞复合体分别在不同场强,不同脉冲时程,单次脉冲下激活后,用7.5μg/mlCB处理3-4h,结果显示,1.20 KV/cm, 30μsec组的卵裂率(64.04±1.72%)及囊胚率(24.64±1.79%)高于其它各组,差异显著(P<0.05)。而死亡率随着场强和脉冲时程的升高而升高。电脉冲激活联合CB、CHX、6-DMAP、CB+CHX、CB+6-DMAP、CHX+6-DMAP、CB+CHX+6-DMAP激活卵母细胞,结果显示,6-DMAP组的卵裂率(80.50±4.52%)和囊胚率(32.22±1.92%)显著高于其它各组(P<0.05),联合激活组的囊胚率显著高于对照组(P<0.05)。三种培养基(PZM-3, NCSU-23, BECM-3)培养猪孤雌胚,结果为,PZM-3和NCSU-23的卵裂率(69.38±3.99%和69.87±3.16%)、囊胚率(39.91±2.17%和34.37±5.11%)及囊胚细胞数(48.38±7.87和38.00±8.57)都显著高于BECM-3(57.05±4.16,24.63±4.58,15.33±4.51)(P<0.05);而PZM-3的囊胚细胞数显著高于NCSU-23(P<0.05),2-4细胞阶段添加EGF和,添加EGF组和添加bFGF组的囊胚率(36.20±5.37%和44.25±5.83%)都显著高于未添加组(19.01±1.72%)(P<0.05),添加bFGF组的囊胚细胞数高于其它各组,无显著性差异(P>0.05)。上述研究结果提示:在本研究试验条件下,以初情期前的青年母猪卵母细胞为试验材料,本实验优选出了较佳的猪卵母细胞孤雌激活的激活条件和孤雌胚体外培养的方案。电激活联合6-DMAP处理3h更有利于卵母细胞的激活和后期发育;PZM-3有利于孤雌胚体外发育,2-4细胞阶段,在NCSU-23内添加10ng/ml bFGF能增加囊胚率和囊胚细胞数。此结果为猪胚胎工程技术的研究和技术改进提供了科学依据。