斑点叉尾鮰肠道益生菌的筛选与特性研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaobudian1980
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由于滥用抗生素而导致的水产品中药物残留、水产养殖动物致病菌耐药性的产生等问题已引起人们的广泛关注。在水产养殖中寻找高效、安全、无残留的渔药替代品已迫在眉睫,益生菌就是一个有希望的替代品。本论文在对斑点叉尾鮰肠道内需氧及兼性厌氧菌群进行分离、鉴定的基础上,利用菌株对水产动物常见病原菌的体外拮抗实验和产胞外酶能力等初步筛选了益生菌株;并对拟选菌株进行培养条件的探讨和培养基的优化;获得的主要结果如下:(1)对斑点叉尾鮰肠道需氧及兼性厌氧菌群进行了定量和定性分析。结果表明:斑点叉尾鮰前肠细菌总数为1.3×10~6cfu/g,中肠细菌总数为1.6×10~6cfu/g,后肠细菌总数为4.6×10~6cfu/g。从斑点叉尾鮰肠道中共检测出阴沟肠杆菌、河流弧菌、类志贺邻单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、大肠埃希氏菌、溶藻弧菌、枯草芽孢杆菌、腐败希瓦菌、杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种、产吲哚金黄杆菌、植生拉乌尔特菌、鲍氏不动杆菌、洋葱伯克霍尔德菌、嗜水气单胞菌、微球菌属、布鲁菌属、气单胞菌属、芽孢杆菌属、棒杆菌属、弧菌属、欧文氏菌属等21个种属的细菌。(2)对患细菌性出血病斑点叉尾鮰与健康斑点叉尾鮰肠道需氧及兼性厌氧菌群进行了比较。结果表明:患细菌性出血病斑点叉尾鮰肠道细菌总数少于健康斑点叉尾鮰,菌群的种类和各菌群所占的比率也存在较大差异。在正常斑点叉尾鮰肠道中共检测到8种细菌,患细菌性出血病斑点叉尾鮰肠道中共检测到4种,正常斑点叉尾鮰肠道中气单胞菌所占比率为46.7%,肠杆菌科占26.4%,弧菌属占13.3%,芽孢杆菌属占2.9%,不动杆菌属占1.9%,微球菌属占1%,棒杆菌属占1%,假单胞菌属占1%,其他占5.7%。患细菌性出血病斑点叉尾鮰肠道中气单胞菌占67.3%,弧菌属占16.3%,肠杆菌科占10.2%,棒杆菌属占1.0%,其他占5.1%。(3)从健康斑点叉尾鮰肠道中分离出342株菌株,通过对常见病原菌的体外拮抗实验和分泌胞外酶能力的研究表明:其中产淀粉酶的59株;产蛋白酶的62株;产脂肪酶的57株;产明胶液化酶的76株。6株细菌能对常见水产动物病原菌产生体外拮抗作用。综合两方面实验,菌株BH0142、BH0124和BHI344比其他菌株更具有开发前景,但菌株BH0142对常用8种抗生素已经产生了耐药性,菌株BH0124经鉴定为已知的水产动物病原菌,最终选取BHI344做为益生菌开发,经鉴定为枯草芽孢杆菌。(4)通过培养条件和培养基优化实验,初步确定菌株BHI344达到最大活菌数的培养条件是:培养基初始pH值7.6,接种量5%(v/v),培养温度35℃。最佳培养基为:牛肉膏2.0%(w/v),葡萄糖1.5%(w/v),氯化钙0.3%(w/v)。培养16h后,BHI344的活菌数能达到2.62×10~9cfu/mL。
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