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目的:昆布多糖作为一种安全性高并具有多种生理活性的天然β-1,3-葡萄糖聚合物,被广泛应用于生物医药领域。本文通过以昆布多糖修饰获得了一种粒径较小、均一稳定且具有良好抗肝癌活性的纳米硒,并采用分子生物学手段对其抗肝癌机制进行了深入研究。方法:利用昆布多糖作为稳定剂和修饰剂,以抗坏血酸还原亚硒酸钠的方法制备得到昆布多糖修饰的纳米硒(LP-SeNPs)。应用透射电子显微镜(TEM)、激光粒度仪、紫外可见光谱、能量散射X射线光谱仪等仪器对合成的纳米硒进行结构表征。采用MTT法研究LP-SeNPs对HepG2肝癌细胞的增殖抑制作用,应用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测LP-SeNPs对细胞凋亡的影响。Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Casepase 9及自噬相关蛋白LC3、p62的表达水平。通过溶酶体活性和酸性的评估检测LP-SeNPs对溶酶体功能的影响。结果:制备得到了粒径大小为60 nm的昆布多糖纳米硒,TEM测定结果发现,LP-SeNPs呈现单分散均匀的球形结构,MTT结果表明,LP-SeNPs对人肝癌HepG2细胞表现出明显的增殖抑制作用。进一步的作用机制研究发现,LP-SeNPs被肝癌细胞摄取后,首先定位于溶酶体,然后由溶酶体释放入胞质发挥作用。Western blot结果显示,LP-SeNPs作用HepG2细胞12和24 h均显著上调Bax和cleaved Casepase 9的表达,并下调Bcl-2的表达水平,表明LP-SeNPs可激活线粒体途径凋亡。此外,孵育LP-SeNPs后能诱导LC3-II和p62蛋白的上调,并能通过影响溶酶体的功能抑制自噬后期进程。结论:本文所制备的昆布多糖纳米硒对人肝癌细胞具有显著的生长抑制作用,其可能是通过抑制自噬和诱导细胞凋亡发挥对人肝癌细胞的抗肿瘤作用。本实验为抗肝癌药物的进一步研究提供了实验依据和理论基础。