背景:泛素(Ubiquitin, Ub)自发现之日起就是一种通用分子,其分子量在8kDa左右,结构上高度保守,主要在蛋白降解过程和许多非蛋白水解依赖的过程中(膜转运,染色质构成和转录,DNA修复和信号转导)起到中转作用。泛素通过一个多步骤过程结合到目标蛋白,又称之为“泛素化”,即与靶蛋白中的赖氨酸形成共价结合的蛋白分子,连接在靶蛋白上的泛素又可被其他泛素继续修饰从而形成多聚泛素链其中需要一个E1泛素激活酶,多种E2泛素结合酶及多种E3泛素连接酶,剩余的结合过程则是泛素化过程中的核心过程,它们由底物特异性决定[13,14 ]。野生型P53是一个快速降解蛋白,p53的突变和集聚加剧了肿瘤细胞的聚集和增多。Natalia Lukashchuk和Karen H. Vousden发现野生型和突变型p53蛋白重叠而明确的通过泛素化降解而使机体病变。P53基因编码蛋白应对外界变化对机体细胞的影响,从而导致细胞周期停滞,细胞凋亡,以及DNA修复。P53作为转化因子能够活化各种能够调节自身反应的蛋白。几乎50%的人类肿瘤的发生与p53的基因突变有关,但是有报道p53的诱导细胞周期的抑制与凋亡有明显的缺陷,恶性黑色素瘤的发生并没有p53的突变,但是恶性程度高,治疗上有着明显的抵抗,这可能与MDM2有关。MDM2是p53下游最有特点的目的基因。p53诱导Mdm2的表达,Mdm2反之抑制p53的活性,形成一个自动调整的负反馈环目的:研究人胆道系统肿瘤中的泛素蛋白(ubiquitin)的表达与胆道系统肿瘤不同病理分型的关系及其临床意义。研究泛素蛋白和p53在胆道肿瘤与胆道炎性组织的表达差异,试图找到胆道系统肿瘤发生机制,以提供一定的研究基础。方法:1)收集我科临床标本,标本固定在4%多聚甲醛与PBS的溶液中,4℃,持续24小时,采用免疫组织化学法检测人胆道肿瘤组织、正常胆道组织以及炎性组织中泛素蛋白的表达及其表达水平,分析人胆道肿瘤组织中泛素蛋白的表达情况与不同临床病理情况之间的相关性。2)胆囊癌、胆管癌、结石性胆囊炎胆囊组织收集同方法1,组织块用RIPA裂解液(50mmol·L-1 Tris (PH8.0), 150mmol·L-1 NaCl, 1mmol·L-1 EDTA,1%NP-40, 0.1% SDS),在裂解液中加入蛋白酶抑制剂,按1:100加入。得到总蛋白后,用蛋白电泳检测蛋白中泛素蛋白和p53的表达情况。3)用半定量PCR技术,我们检测胆道肿瘤组织以及相应癌旁组织中泛素mRNA水平。当然,我们首先检测胆管癌细胞系QBC-939的泛素mRNA情况。结果:1)人胆道肿瘤组织中泛素蛋白的表达显著高于正常组织以及炎性组织中泛素蛋白的表达(p<0.05)。泛素蛋白的表达与病理组织学分级有明显关系(p<0.05)。2)在蛋白电泳检测中,胆道系统肿瘤和结石性胆囊炎胆囊组织中的表达情况分别是1.80±0.29和1.25±0.30。然后用独立t-检验检测二者的差异(p=0.005, T=3.394)。p53蛋白表达水平在胆道系统肿瘤和结石性胆囊炎胆囊组织中无明显统计学差异(p=0.394)。3)泛素mRNA水平在胆道肿瘤组织中比较相应的癌旁组织上调(p<0.05).结论:泛素蛋白在人胆道肿瘤组织中表达水平升高,可能与胆道系统肿瘤的恶性程度、疾病的进程有密切的关系。而p53的表达水平在胆道肿瘤组织中和结石性胆囊炎胆囊组织中无明显差异。这可能与MDM2的抑制作用有关系。在用半定量PCR技术的基础上证实了泛素mRNA在肿瘤组织中上调。