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戊型肝炎（HE）过去被称为非甲非乙型肝炎，直到1989年Reyes等自实验感染的猕猴胆汁中，应用分子克隆技术获得了病毒的基因克隆，正式命名为戊型肝炎病毒（HEV）后，才改称为戊型肝炎。HE是经消化道传播的急性传染病，发病率逐年升高，有研究表明HEV还可通过血液途径传播，甚至通过垂直传播引起新生儿急性HE或早产，病死率高达43．75％，最近发现HE在器官移植患者中可以慢性化。HE在世界各地发展中国家广泛流行，在发达国家也有散发。我国先后曾发生多次TIE流行，1986-1988年新疆南部因水源污染发生过世界上规模最大的HE暴发流行，约有12万人发病。近年来我国HE的发病率和死亡率呈逐年上升趋势，已被列为因HE发病和死亡而引起的经济负担最为严重的国家之一。根据全基因序列分析，HEV在全世界主要有4个基因型：以缅甸株为代表的第1基因型、以墨西哥株为代表的第2基因型、以美国株为代表的第3基因型和以中国株为代表的第4基因型，我国早年检出的毒株主要是1型，但近年以4型散发为主。由于HE尚无特效治疗方法，也无特异性被动和主动免疫制剂可供预防。因此准确诊断HE急性感染、亚临床感染、既往感染，不仅对于患者的治疗和预后具有重要意义，还可以及早发现具有传染性的HE患者，做到及早隔离传染源，防止病毒污染水源和食物，造成大规模爆发流行的公共卫生突发事件。
RT-PCR检测HEV-RNA可用于诊断急性HE，但血液或粪便中HEV RNA持续时间较短，约30天，仅能在疾病早期做出诊断，而且操作复杂、成本高，不能在临床广泛开展。因此HE诊断主要依靠检测抗体的免疫学诊断。研究表明抗-HEV IgM是HEV急性感染的指标之一，但其检测易受类风湿因子等干扰，易产生假阳性，而抗-HEV IgG持续时间较长，不能区分急性感染还是既往感染。近年来有报道指出抗-HEV IgA也是一个HEV急性感染的指标，在大部分HE患者病程早期抗．HEV IgA和抗-HEV IgM均能被检测到，但也有小部分感染者表现为抗-HEV IgM阴性而抗-HEV IgA阳性，越来越多的研究表明抗-HEV IgA对HEV感染的诊断有重要意义。目前国内外还没有抗-HEV IgA诊断试剂盒问世，仅有瑞士的Diacheck公司能提供专门用于实验研究的HEV IgA检测试剂盒（ELISA间接法），但没有获得FDA认证，而且由于使用第1、2基因型抗原包被，导致HEV第3基因型毒株感染的检出率大幅下降。因此本文用抗人IgAα链McAb和酶标HEV多基因型重组抗原（HRP-p166Mix）在国内外首次建立一种特异、敏感的IgA捕获法ELISA用于检测抗-HEV IgA，并评价其临床意义。
本研究分为以下二个部分：
一、抗人IgA McAb的制备、纯化和鉴定
应用B淋巴细胞杂交瘤技术，以人IgA免疫7～8周龄雌性BALB/c小鼠后获得3株稳定分泌抗人IgA的杂交瘤细胞株，分别命名为582、5G12和7A8。用ELISA法测定该3株杂交瘤细胞在小鼠体内诱生的McAb腹水，抗体效价可达1：106～1：107。McAb亚类鉴定均为IgG1。以Ab SpinTrap试剂盒纯化McAb腹水后，582、5G12和7A8浓度分别为0．35mg/ml、0．3mg/ml、0．22mg/ml。纯化产物经SDS-PAGE电泳鉴定，在小鼠免疫球蛋白IgG重链预计分子量55kD和轻链分子量25kD处分别有一清晰条带，无杂蛋白带，说明纯化McAb达到电泳纯度。将3种McAbs分别与人IgA和人IgM反应性时，发现5B2与人IgA和人IgM同时反应，而5G12和7As只与人IgA反应；Western Blot分析进一步发现5B2只在25kD处有条带而在55kD处无条带，5G12和7A8只在55kD处有条带而在25kD处无条带。由于IgA分子包括重链（α链）和轻链（k或λ链），α链是IgA分子所特有，而轻链是各类免疫球蛋白共有，因此结果表明5B2是针对人IgA轻链的McAb，5G12和7A8是针对人IgAα链的McAbs。
二、HEV IgA捕获法ELISA的建立及其评价
首先我们对5G12和7A8捕获人IgA的能力做了比较，发现5G12捕获人IgA的效率高，因此选甩5G12包被微孔板，建立基于HEV多基因型混合抗原的ELISA IgA抗体捕获法。在优化实验条件的基础上，用本法检测1028份健康体检标本，95％的标本的吸光度（A450）值都集中在0～0．05之间，符合正态分布，其A450均值为0．016，标准差S为0．015，当临界值=阴性对照均值A+6S时，所检测1028份血清均为阴性。因此将捕获法ELISA检测抗-HEV IgA的临界值（Cutoff）设为阴性对照均值A+0．09时，如果所检标本的A值小于临界值则判为阴性，所检标本的A值大于或等于临界值则判为阳性。
用HEV IgA捕获法ELISA检测甲型肝炎患者血清26份，乙型肝炎患者血清240份，丙型肝炎患者血清58份，肝硬化患者血清32份，只有1份丙型肝炎患者的抗-HEV IgA为阳性，而其抗-HEV IgM，抗-HEV IgG，HEV-RNA也均阳性，说明该病例是HCV合并HEV感染。上述结果表明HEV IgA捕获法ELISA具有较好的特异性，与其它类型肝炎IgA抗体无交叉反应。
用所建立的HEV IgA捕获法ELISA检测2008年1月到2009年1月间收集自南京市第二医院的HE患者或疑似病例血清483份，其中抗-HEV IgM和IgG均阳性的标本150份，其抗-HEV IgA全部阳性，阳性率100％；抗-HEV IgM阳性而IgG阴性患者血清18份，其中抗-HEV IgA阳性15份，阳性率83．3％，同时检测HEV RNA，3份抗-HEV IgA阴性标本的HEVRNA也均阴性；抗-HEV IgM阴性而IgG阳性血清26份，其中有2份标本抗-HEV IgA阳性，检测这两份标本的HEV RNA均为阳性；抗-HEV IgM和IgG双阴性血清标本289份，抗-HEV IgA全部阴性。未检测到抗-HEV IgM和抗-HEV IgA同时阴性而HEV RNA阳性的标本。结果表明抗-HEV IgA与抗-HEV IgM均为HEV急性感染的指标，但并非所有HEV急性感染患者血清中均能同时检测出抗-HEV IgA和抗-HEV IgM，单独检测抗-HEV IgA或抗-HEV IgM均会造成漏诊，抗-HEV IgA与抗-HEV IgM同时检测则可提高戊型肝炎的检出率。
综上所述，基于HEV多基因型混合抗原的HEV IgA捕获法ELISA具有较好的特异性和较高的敏感性。抗-HEV IgM和抗-HEV IgA均是HEV急性感染的指标，可以用于HE的诊断，但单独检测抗-HEV IgA或抗-HEV IgM均会造成漏诊，联合检测抗-HEV IgA与抗-HEV IgM可提高急性HE的检出率，提高诊断的准确性。