【摘 要】
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生长素应答元件(AuxRE)存在于很多生长素诱导基因的启动子中,并具有对生长素作用的应答活性.该研究利用酵母单杂交技术,试图从解调控的胡萝卜体细胞胚中分离能够与生长素应答
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生长素应答元件(AuxRE)存在于很多生长素诱导基因的启动子中,并具有对生长素作用的应答活性.该研究利用酵母单杂交技术,试图从解调控的胡萝卜体细胞胚中分离能够与生长素应答元件特异性结合的蛋白质因子及其相应的编码基因.为此,以解调控48h的胡萝卜体细胞胚为材料,构建了cDNA表达文库.将含有生长素应答元件的报告质粒pHISi-AuxRE4和pLacZi-AuxRE4依次整合到酵母基因组中.提取文库的噬菌粒DNA,转化含双元报告质粒的酵母菌株,以营养缺陷型培养基和β-半乳糖苷酶显色反应两种方法,联合筛选阳性克隆.从已获得的15个阳性克隆中,分别提取噬菌粒DNA,并转化至大肠杆菌中.用从大肠杆菌转化子中提取的噬菌粒DNA,再转化酵母细胞.进一步的显色反应结果显示,其中11个克隆仍然呈阳性.已对其中8个阳性克隆中的外源插入片段进行了序列测定和结构域分析.体外结合分析结果显示,在酵母中表达的AxRF-1蛋白能够在体外与生长素应答元件结合.
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