【摘 要】
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目的:研究新型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂AR-42对人视网膜母细胞瘤细胞Y79体外增殖和凋亡的影响方法:本实验选用人视网膜母细胞瘤细胞株Y79细胞为研究对象,组蛋白去乙酰化酶抑制剂AR-42作为干预条件。首先对Y79细胞进行分组处理,实验组给予不同浓度的AR-42（0.05-0.8μM,即0.05/0.1/0.2/0.4/0.8μM,DMSO溶解并用含10%FBS的RPMI 1640培养基稀释）处理
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目的:研究新型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂AR-42对人视网膜母细胞瘤细胞Y79体外增殖和凋亡的影响方法:本实验选用人视网膜母细胞瘤细胞株Y79细胞为研究对象,组蛋白去乙酰化酶抑制剂AR-42作为干预条件。首先对Y79细胞进行分组处理,实验组给予不同浓度的AR-42（0.05-0.8μM,即0.05/0.1/0.2/0.4/0.8μM,DMSO溶解并用含10%FBS的RPMI 1640培养基稀释）处理,对照组给予含DMSO溶剂的同等体积的培养基处理（使DMSO终浓度<0.5%）。然后进行以下实验:MTT法观察实验组、对照组细胞培养至24h、48h、72h后的细胞生长活性和浓度依赖性,明确AR-42作用于Y79细胞的半数抑制浓度（IC50）。利用软琼脂糖克隆形成实验观察不同浓度的AR-42处理Y79细胞后细胞克隆形成情况,评估其增殖能力的改变。Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测实验组与对照组培养48h后的细胞凋亡情况以及Western blot检测0.05-0.8μM的AR-42作用下Y79细胞组蛋白H3乙酰化水平变化及凋亡相关蛋白caspase 3/9、cleaved-caspase 3/9、底物PARP激活水平差异。最后通过AR-42与顺铂（DDP）的药物协同实验评估联合用药对Y79细胞的作用效果。结果:AR-42能够有效抑制Y79细胞的体外生长增殖。MTT法结果显示,AR-42以浓度依赖性和时间依赖性方式抑制Y79细胞的生长活性,并且确定AR-42作用Y79细胞48h后的半数抑制浓度在0.4μM左右,此条件下AR-42在发挥有效抑制Y79细胞生长的同时对正常细胞毒副作用小。软琼脂糖克隆形成实验结果显示,0.05-0.8μM的AR-42均抑制Y79细胞的克隆形成,表明了增殖能力的降低,与对照组（DMSO组）相比,差异有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪结果显示AR-42增加了Y79细胞凋亡率,其中,0.2、0.4、0.8μM处理组的凋亡率明显增高,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。Western blot结果显示AR-42提高了Y79细胞组蛋白H3乙酰化水平,并且活化了剪切体cleaved-caspase 3/9及cleaved-PARP的表达。AR-42联合顺铂（DDP）的药物协同实验显示出两药对Y79细胞的协同抑制作用,且AR-42浓度为0.2μM、顺铂浓度为0.125μM时的协同抑制效应最显著（CDI<0.7）。结论:AR-42可有效抑制人视网膜母细胞瘤细胞株Y79的体外生长增殖,且与传统的化疗药物顺铂（DDP）联合使用具有显著的协同抑制作用;AR-42通过激活caspase依赖的凋亡途径诱导Y79细胞凋亡。
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