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高效液相色谱是中药活性成分分离分析的有效技术之一,具有高效、灵敏、快速、准确、适用范围广、重现性好及自动化操作等优点,特别适合于分析高分子量、高沸点、不易挥发、热稳定性差、极性有差异的有机化合物,现已被广泛应用于生物、医学、药学、化学、石化、材料、环境、信息等领域,在中药活性成分分析及质量监控中更引起了人们的高度重视和极大兴趣。
本论文在简单总结了高效液相色谱在中药活性成分分离分析和质量控制中的应用进展基础上,运用反相高效液相色谱法这一最常用的液相色谱分离模式和简单、重现性好的等度洗脱方法,分别建立了中药大黄、八角莲、丹参、龙血竭和茶叶等中的部分主要活性成分的分离分析方法。论文完成的研究工作内容摘要如下:
1、研究了一个同时分离和测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的反相高效液相色谱新方法。在优化分离条件时,考虑到分析对象的结构中存在可以电离的酚羟基,因此在流动相中采用了离子抑制方法以避免色谱峰的拖尾现象。最终优化得到的色谱条件为:流动相是甲醇-0.1%H<,3>PO<,4>(85:15,v/v)的混合溶液,流速为1.5mL/min,色谱柱温为40℃。所建立的方法可以在10min内同时将芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分开,且样品中的其它共存组分不干扰测定,能用于中药大黄、决明子及复方制剂三黄片、牛黄解毒片和排毒养颜胶囊中这五类葸醌类组分的同时分离和定量测定。结果表明,此方法不仅简单、快速、重现性好,而且线性范围宽、检出限低,有应用前景。
2、采用体积比为甲醇-水(65:35,v/v)的混合溶液为流动相,在1.0mL/min流速和40℃柱温下,建立了一个能在5min内同时分离和测定4′-去甲鬼臼毒素和鬼臼毒素含量的反相高效液相色谱分析方法,而现有报道中还未见同时分离和测定4′-去甲鬼臼毒素和鬼臼毒素的反相高效液相色谱方法。经过对方法的分析特性进行研究后发现,方法具有简单、快速、灵敏、重现性好等优点,将其应用于中药八角莲的叶、茎、须和根中这两个组分的同时分离测定,结果满意。
3、针对隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ<,A>的结构特点,本文采用反相高效液相色谱法,在详细优化分离与检测条件后,建立了一个以甲醇-0.1%H<,3>PO<,4>(85:15,v/v)混合溶液为流动相的测定隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ<,A>的色谱分析新方法。与一些类似的方法相比,该方法简单、快速、准确度高,可以在10min内实现中药丹参及复方丹参片和复方丹参滴丸中这三个组分的含量测定,样品的加标回收率均在在90%~110%之间。
4、因为龙血素A、龙血素B与剑叶龙血素C极性相差很大,为保证分析时间和定量准确性,本文采用建立一个方法同时测定龙血素A和B,建立另一个方法单独测定剑叶龙血素C的途径,实现了龙血竭及其发酵产物中龙血素A、龙血素B和剑叶龙血素C的含量测定。用于龙血素A和B同时测定的流动相为乙腈-1.0%H<,3>PO<,4>水溶液(32:68,v/v)混合体系,龙血素A和龙血素B可以在20 min内出峰;而用于单独测定剑叶龙血素C的流动相为乙腈.水溶液(67:33,v/v)混合体系,剑叶龙血素C可以在10min内出峰。所建立的方法具有简单、快速、重现性好、灵敏度高、线性范围宽等优点,可以作为血竭质量测定的参考。
5、以甲醇-0.1%H<,3>PO<,4>(33:67,v/v)的混合溶液为流动相,流速为1.0mL/min,建立了一个同时分离和测定五个嘌呤碱(黄嘌呤、次黄嘌呤、可可碱、茶碱和咖啡因)含量的反相高效液相色谱分析新方法,并将此法应用于不同产地的茶叶及茶饮料中可可碱、茶碱和咖啡因的同时分离测定。结果表明,该方法具有快速、简单、灵敏度高和线性范围宽的特点,可以用于茶叶及茶饮料的分析测定。