本研究利用细菌呼吸作用使指示剂颜色发生改变的原理，选取蔗糖、葡萄糖、淀粉、糊精等95种碳源，以及高灵敏度的指示剂Ⅲ，通过指示剂浓度的优化，培养基固化，试剂盒的组装，研制出细菌碳源利用快速测定试剂盒BiobiqA；研究还选取了7个初始生长pH值，8个NaCl浓度，8种抗生素四种浓度共47个测试特征，经过真空无菌干燥固化，研制出细菌生理抗性快速测定试剂盒BiobiqB。 建立了两试剂盒标准的测定方法：测定时，BiobiqA试剂盒每孔中接种150μL0.1OD600的半固体菌悬液(0.2％琼脂-去离子水)，而BiobiqB则接种液体菌悬液。将加好菌悬液的试剂盒放入28～37℃恒温细菌培养箱中培养18～24 h。BiobiqA通过指示剂颜色改变，BiobiqB通过各孔中培养基的混浊度，结合各自对照孔A1的颜色或混浊度来确定细菌碳源利用情况和细菌生理抗性特征。 对两试剂盒适用广谱性、稳定性和准确性进行了系统的检测试验。检测结果表明：试剂盒适应性广，能对不同科、属细菌进行碳源利用和生理抗性测定；试剂盒性能稳定，对同一菌株进行重复测定，结果符合率为100％；比较试剂盒的目测值和酶标仪测读值，两结果一致；用BiobiqA和商品化试剂盒BiologGN2同时对一菌株进行碳源利用情况测定，比较两试剂盒共有的60种碳源测定结果，仅L-羟脯氨酸、淀粉测定结果存在微弱差异(BiobiqA中为不利用，BiologGN2中为微弱利用)，其余58种碳源测定结果一致，表明自制试剂盒的准确性高，可信度好。 应用试剂盒对9株细菌的碳源利用和生理抗性进行测定，测定结果显示9株细菌都能利用糊精、蔗糖、D-葡萄糖、麦芽糖等13种碳源，均不能利用木糖醇、菊糖、D-阿糖醇等15种碳源。细菌都能在pH值4～10、NaCl浓度1％～5％、氨苄青霉素、红霉素、新霉素、链霉素浓度为5μg/mL的条件下生长。在卡那霉素、四环素浓度达到50μg/mL，庆大霉素、氯霉素、新霉素浓度为300ug/mL条件都不能生长。142项测试指标中细菌共同具有的生理特征有55项，其余的87项表现出菌间生理差异性，表明试剂盒能够很好的反映出菌株间多样性。 将试剂盒对11株肠杆菌科细菌生理特性的测定结果用于细菌的数值分类，并同时采用IS-PCR和16S rDNA序列分析对细菌进行聚类分析。数值分类结果显示在88.0％的相似性水平上可将菌株HW050与HW051、ZH4与ZH9、G1与Enteorbactercloacae ATCC 10347T、X7与Phytobacter diazotrophicus Ls8T分别聚为一类。菌株YH4、Enterobacter aerogenes JCMl235T和Pantoea agglomerans ATCC27155T则各单独为一类。与IS-PCR和16S rDNA序列分析结果有较好的一致性。试剂盒的应用研究表明试验研制的试剂盒具有操作简便、测定快速、试剂用量少、成本低、重复性好、结果准确等优点可用于对细菌生理特性的测定及细菌的数值分类研究中，具有良好的应用前景。