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应激是机体受到应激性刺激后所产生的一种非特异性反应,畜禽养殖业的发展以及国内外畜禽贸易的繁荣,畜禽运输成为畜牧业中的必要环节。本试验随机选择相同环境中饲养的6头夏南牛((?)),用牛用动物运输车进行运输应激,运输时间为运输前1h、运输前Oh；运输2h、3h、9h、10h、15h、20h;运输后10h、20h、30h。道路包括城市道路、国道、高速的混合路,速度控制在60-70km/h,整个运输过程没有饮水和喂食。对试验肉牛进行及时采取血液,分离血清、血浆、淋巴细胞,分离的血清和血浆于-20℃保存,分别用于皮质醇(Cor)和促肾上激素(ACTH)的检测,分离淋巴细胞于-80℃保存,通过RT-PCR克隆了肉牛外周血淋巴细胞中受运输胁迫诱导基因,用于热应激蛋白(HSPs)酶联免疫反应检测和对应mRNA在不同运输时间阶段的表达特性。从而探讨肉牛在长途运输过程中热应激蛋白(HSPs)表达及其对应的mRNA转录规律,及其它们之间的相关性。利用RT-PCR方法克隆了1个肉牛运输胁迫诱导基因：HSP70,其基因克隆片段长度为985bp。BLASTX搜索结果显示,克隆基因编码的核苷酸序列与多个动物中的热激蛋白HSP70同源性很高,其中与牛的AY662497.1、绵羊的EF197836.1和野猪的NM213766.1序列同源性分别高达99%、99%和97%。利用放射免疫法对激素水平进行分析,研究长途运输应激对肉牛激素水平的影响。结果表明,试验牛血清皮质醇(Cor)在运输前较低,在运输10h、15h和20h极显著增加(P<0.01),运输到达后慢慢恢复到常水平。在运输前试验牛血浆中促肾上腺皮质激素(ACTH)较低,运输3h时极显著升高(P<0.01),这种升高趋势持续到运后20h,运达后30小时恢复止常水平。实时荧光定量法探讨了运输应激牛淋巴细胞中HSPs mRNA转录水平,结果证明,试验牛的外周血淋巴细胞的HSP70mRNA的转录水平在运输3h、9h显著增加(P<0.05)随后表达恢复到运输前水平；HSP27mRNA转录水平在运输3h显著升高(P<0.05)；HSP90mRNA转录水平仅在运后10h开始升高,并在运后20h极显著升高(P<0.01),达到最大值。商业化试剂盒ELISA测定运输应激肉牛外周血淋巴细胞中的HSP70、HSP27和HSP90的水平。通过标准曲线法完成样品定量,用β-actin控制蛋白提取过程中出现的误差。结果显示,试验牛的外周血淋巴细胞的HSP70在运输2h、3h、9h的表达极显著增加(P<0.01),随后表达恢复到运输前的水平,HSP27的表达与HSP70的趋势相似,HSP27在运输9h极显著增加(P<0.01),随后降低并恢复到运前水平,HSP90在运输9h表达极显著升高(P<0.01)。