咬合创伤发生时,牙周组织往往承受着不同类型以及不同方向的力,过大的压应力作用于牙槽嵴,可导致额外的骨吸收,这是一种高转换的骨改建过程,有关这一过程的详细机制,至今仍不清楚。从正畸牙齿移动以及牙周炎、根尖周炎等疾病与细胞因子关系的研究证实,某些细胞因子在骨吸收过程中起着十分重要的作用。已发现的与骨改建相关的细胞因子如白细胞介素-1,白细胞介素-6和肿瘤坏死因子、核因子-kB受体活化因子配体(RANKL)等,在咬合创伤中对牙周组织改建有何影响,表达有无变化、有何特点及规律等经检索未见研究报道。 本研究通过建立大鼠咬合创伤模型,观察在咬合创伤去除前后细胞因子在牙周组织中的表达状况,了解其改变与咬合创伤病变发展、愈后的关系,为临床进一步探讨咬合创伤性牙周改变的病理过程、发病机制和恢复过程,并为临床实施干预的可能性和方法提供实验依据。 第一部分 大鼠咬合创伤模型的建立 目的:探讨建立创伤咬合动物模型的有效方法,为探讨咬合创伤致牙周组织的改建的研究提供依据。 方法:将35只大鼠随机分为7组,每组5只。即0d组,1d组,3d组,7d组,14d组,28d组及创伤14d后咬合高点去除14天组。除0d组外各组粘结0.5mm高方丝。预定实验时间摄下颌磨牙根尖X片及制作不脱钙牙周组织切片。 结果:观测时间14d内所有方丝固位良好;28d有3例脱落。创伤牙可见咬合面磨损,根尖X片显示牙周膜微增宽。创伤组大鼠HE染色显示受压迫侧(单侧或双侧)牙槽骨边缘破骨细胞趋附,牙槽骨边缘凹凸不平。结论:大鼠磨牙早接触的创伤咬合模型有效,可用于咬合创伤的基础研究。 第二部分 咬合创伤去除前后大鼠牙周组织IL-1β、IL-6、TNF α的表达 实验1 咬合创伤去除前后大鼠牙周组织IL-1 β的蛋白及mRNA表达 目的:探讨咬合创伤对大鼠牙周组织IL-1 β表达的影响。 方法1:选用35只SD雄性大鼠,每组5只;分组为:对照组、咬合创伤1d组、3d组、7d组、14d组、28d组、去除创伤组。建立大鼠咬合创伤模型。制作不脱钙牙周组织标本,组织形态观察及免疫组化染色。 方法2:选用70只SD雄性大鼠,每组10只,分别为0d组,创伤1d组,3d组,7d组,14d组,28d组和创伤去除组;建立大鼠咬合创伤模型。在无RNase条件下,每组5只大鼠提取牙周膜及牙槽骨总RNA,另5只提取牙槽骨RNA。RT-PCR检测IL-1βmRNA表达。 结果:1.咬合创伤后IL—1β在牙周膜上蛋白表达逐渐增强,第7天及14天最强,以后逐渐减弱。成骨细胞第7天后部分表达,逐渐增多。 2.去除创伤后,IL—1β在牙周膜上蛋白表达减弱,但仍高于正常组。 3.咬合创伤后,IL—1βmRNA在牙槽骨及牙周膜中表达以牙周膜表达为主,且逐渐增强,第14天达到高峰。 4.去除创伤后,IL—1βmRNA在牙槽骨及牙周膜中表达减弱,仍高于正常