苜蓿是重要的饲草作物,同时在水土保持方面发挥着重要的作用。花药培养可以在短时间内获得加倍单倍体纯系,缩短育种年限和提高选择效率。为了提高苜蓿花药培养效率,以小孢子发育处于单核中期到单核靠边期的苜蓿花药为材料,对花药培养预处理方法和培养基进行了研究,建立了苜蓿花药培养高效再生体系。试验结果如下:(1)苜蓿花药培养适宜的灭菌方法是将花蕾用自来水流水缓慢冲洗30 min,70%酒精浸泡灭菌2 s,接着用0.1%升汞溶液浸泡灭菌4 min,最后用无菌蒸馏水漂洗5次。(2)花药经4℃低温预处理3天或培养初期15℃低温预培养3天可以提高愈伤组织诱导率。(3)采用固液双层漂浮培养比固体培养和液体漂浮培养诱导效果好。接种密度以每个50 mL三角瓶接种5～10朵小花的花药为宜。以改良Nitsch2为基本培养基,附加2,4-D 2.0 mg/L和6-BA 0.5 mg/L,麦芽糖6%～9%的苜蓿花药愈伤组织诱导率较高。(4) MS培养基附加NAA 0.5 mg/L和KT 2 mg/L,蔗糖3%或蔗糖1.5% +麦芽糖1.5%的绿苗分化率较高。(5)培养基中附加水解酪蛋白700 mg/L或谷氨酰胺700 mg/L或脯氨酸600 mg/L对愈伤组织诱导和绿苗分化都是有利的。(6)生根培养基为1/2 MS附加1%蔗糖。