本实验通过建立敏感、特异的检测弓形虫的聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR），来评价大蒜素单独或联合用药治疗弓形虫病的疗效，以期获得毒副作用小、治疗效果好、患者可长程服用的药物。首先建立检测弓形虫的PCR方法。从常规传代的小鼠腹腔中收集、纯化RH株弓形虫，提取DNA，将获得的纯弓形虫DNA为模板，以B1引物进行扩增，实验中分别设置不同的退火温度和Mg²⁺浓度，以优化PCR扩增的关键步骤。以1×10⁴弓形虫感染每只小鼠，分别于感染后2、3、4天和濒死前随机取3只小鼠的血、肝脏组织并提取DNA，用于评价PCR反应在检测模拟临床样本的实验感染小鼠组织标本的可行性。结果B1-PCR扩增所需最适退火温度为55℃，Mg²⁺浓度为1.5mmol/L或2.0mmol/L，其余步骤按常规条件。在该条件下，PCR能检测1.3pg弓形虫DNA（相当于一个虫体），且不扩增隐孢子虫、卡氏肺孢子虫、疟原虫的DNA。检测实验感染小鼠血、肝脏样本，在感染后2d，3只鼠血样本PCR结果阳性，3只小鼠肝标本2只阳性；感染后3d至濒死前所有小鼠检测结果均阳性；血样本阳性检出率100％（11/11），肝脏组织样本阳性检出率81.8％（9/11）。 用已建立的PCR技术来监测大蒜素单独或联合用药治疗弓形虫病的疗效。以2×10⁴弓形虫感染147只小鼠，然后将所有小鼠随机分成5组：A组，联合用药组，SMZco连续给药7d，大蒜素连续给药21d；B组，联合用药组，SMZco连续给药14d，大蒜素连续给药21d；C组，单纯大蒜素组，大蒜素连续给药21d；D组，单纯SMZco组，连续给药7d。E组，未治疗对照组，灌胃相同量的生理盐水21d。从各组中随机取9只用于观察存活时间。于感染后5、10、15、20、25、30、40、50d从每组随机取3只小鼠，取血及肝脏，分别提取DNA，用PCR方法进行检测。同时，对各组的死亡情况、存活时间进行分析。结果，PCR检 灭津医科大学硕土学位论文 测实验小鼠感染后 sd血标本，除单纯大蒜素组有特异的 194hp带，证明有虫血 症外，其余各组均未见扩增带。感染后 10d直到观察结束，均未见特异扩增带。 检测肝脏标本发现，感染后sd，直到感染后50天，所有检测标本均有特异带， 所不同的是感染后sd扩增带较亮，治疗结束后到观察终止，扩增带较弱。由各 组的死亡情况及生存率看，单纯SMZc。组与未治疗对照组相比，死亡时间延迟， 生存率高；单纯大蒜素组与对照组相比，没有差别；联合用药A组与单纯SMZc。 组相比，死亡时间延迟，生存率高；联合用药A组与联合用药B组相比，没有 显著差别。 研究结果表明，SMZC。治疗急性期弓形虫病是有效的，大蒜素单独治疗急 性期弓形虫病没有作用，但与SMZc。合用后，显示大蒜素具有一定协同作用。