环境水军团菌鉴定分型及其致病性研究

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目的:了解广东新会地区环境水源中军团菌的分布状况,对分离株进行分子分型,并检测其致病性,掌握该地区环境水源中军团菌的基本特征,为军团菌病的预防控制提供依据。方法:(1)采取公共场所环境水源,对其进行军团菌的分离培养,并以革兰染色、生化反应、血清学及mip样基因测序等方法进行菌种鉴定,探讨公共场所军团菌分布情况。(2)对已鉴定的嗜肺军团菌,采取扩增片段长度多态性分析、mip基因序列分析等进行分子分型,比较不同分子分型方法的分型能力、重复性、一致率等,并建立本地区军团菌流行病学档案。(3)应用特异性引物检测已鉴定分型的嗜肺军团菌的lvh和rtxA毒力基因,判断其致病性;同时对其毒力岛基因进行检测及基因序列分析,探讨不同分型嗜肺军团菌毒力岛分布情况及其可能起源。结果:(1)8个采样点中7个分离出军团菌,23份水样中20份军团菌培养呈阳性,阳性率为86.9%,检出军团菌32株,其中嗜肺军团菌23株,非嗜肺军团菌9株,包括戈氏军团菌5株,菲氏军团菌2株,长滩军团菌2株,同时发现同一水样中有多种军团菌共存现象。(2)24株嗜肺军团菌可分为21个AFLP型,10个AFLP群,其中AFLP-A群是新会地区优势菌群;采用mip基因序列分析可将该24株嗜肺军团菌分为9个型,且mip基因测序分子分型与AFLP分型具有相关性。(3)本实验室分离的23株嗜肺军团菌,其中强毒株为21株(91.3%),弱毒株为2株(8.7%),未发现无毒株;携带毒力岛的菌株为17株(73.91%),且毒力岛基因与其他基因起源不一致。结论:(1)广东新会地区环境水中军团菌污染较严重,存在多种军团菌种。(2)该地区嗜肺军团菌分子分型多样化,且存在优势菌群。(3)新会地区分离的嗜肺军团菌多为强毒株,亦携带毒力岛,致病性较强,已对人群健康构成潜在威胁。(4)应用合理的检测方法,定期对公共环境水源进行军团菌检测,及时发现问题并采取相关措施将大大减少军团菌爆发流行。
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