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[目的]
通过骨质疏松实验动物模型的建立,观察在骨质疏松状态下纯钛螺纹种植体周围骨组织的反应情况,观察补骨胶囊对骨质疏松状态下种植体周围骨代谢及骨结合程度的影响,探讨骨质疏松症对口腔科牙种植修复的影响,及中药在口腔科牙种植领域的应用前景。
[方法]
选用8月龄雌性SD大鼠45只,随机分为3组:(1)假手术组(简称A组,接受双侧卵巢附近脂肪组织切除术)、(2)去卵巢组(简称B组,接受双侧卵巢切除术)、(3)中药组(简称C组,接受双侧卵巢切除术加补骨胶囊治疗)。每周监测大鼠体质量变化。术后3个月每组大鼠随机抽取5只,行全身骨密度测量,确定骨质疏松模型建立。在大鼠胫骨近中干骺端分别植入纯钛螺纹柱状种植体。种植术后第一天始,C组大鼠用补骨胶囊冲剂灌胃(按0.5g生药/mL配制补骨胶囊冲剂,每只大鼠按体质量7mL/kg取冲剂灌胃1/日,其它两组按体质量7mL/kg灌服生理盐水)。于种植术后第1个月、第2个月、第3个月时分批处死大鼠,取全血,测量血清钙离子、磷离子、碱性磷酸酶水平。带种植体的胫骨放入10%甲醛缓冲溶液中固定,10%EDTA溶液脱钙,梯度酒精脱水和石蜡包埋后制作组织学切片,行HE染色及BMP-2免疫组化染色,用以组织形态学、形态计量学观察及免疫组化检测。
[结果]
1骨密度(BMD)X线测量结果:卵巢切除术后第3个月,B组和C组的全身BMD均明显低于A组(P<0.05),B组和C组的体质量均明显高于A组(P<0.05),这说明用去势法已成功建立骨质疏松动物模型。
2血清碱性磷酸酶、钙离子、磷离子浓度变化:种植术后1、2、3个月时,三组间血清钙离子浓度,磷离子浓度差异无统计学意义(P>0.05),但种植术后1个月,C组钙磷乘积较A组显著升高(P<0.05),种植术后2、3个月时,三组间无明显差异(P>0.05);种植术后1个月,C组碱性磷酸酶浓度较A、B组显著增高(P<0.05),种植术后2、3个月,三组间无显著差异(P>0.05)。这说明服补骨胶囊早期能升高血清碱性磷酸酶浓度和钙磷乘积。
3 HE染色组织形态观察:(1)种植术后第1个月组织学观察结果:A组结合骨板较薄,连续性较好。在皮质骨区主要为编织骨,骨松质区骨小梁较密集,成骨细胞及破骨细胞较少;B组结合骨板较薄,连续性差,部分间隙部位被胶原纤维束所替代,骨松质区骨小梁稀疏,成骨细胞及破骨细胞均较多;C组可见结合骨板连续性较好,较薄,骨松质区骨小梁密集,成骨细胞较多。(2)种植术后第2个月组织学观察结果:A组结合骨板较厚,连续性较好,破骨细胞少见;B组结合骨板较薄,有一定的连续性,骨小梁稀疏粗细不均,排列紊乱;C组结合骨板较厚,结合骨板与和骨小梁周围可见大量的柱状成骨细胞排列整齐。(3)种植术后第3个月组织学观察结果:A组结合骨板较厚,松质区骨小梁密集,沿骨小梁排列的成骨细胞多为扁平柱状,破骨细胞少见;B组结合骨板较薄,松质骨区骨小梁稀疏,破骨细胞较多;C组类似于A组的镜下形态,但成骨细胞较多。
4骨组织形态计量学观察:(1)种植术后第1个月检测结果:A组骨小梁宽度、松质区骨量较B、C组升高(P<0.05),结合骨板宽度较B组升高(P<0.05),A组成骨细胞数较C组减少(P<0.05),B组破骨细胞数较A组升高(P<0.05);(2)种植术后第2个月检测结果:A组骨小梁宽度较B、C组升高(P<0.05),B组松质区骨量较A组降低(P<0.05);B组破骨细胞数较A、C组升高(P<0.05);(3)种植术后第3个月检测结果:B组骨小梁宽度、松质区骨量较A组降低(P<0.05),三组间成数细胞数、破骨细胞数、结合骨板无明显差异(P>0.05)。这说明种植术后早期,去卵巢组种植体骨结合骨板较薄,骨质疏松,破骨细胞增多,中药组种植体周围骨质成骨细胞增多,种植体骨结合与假手术组无明显差异。种植术后后期,三组间无明显差异,均能形成种植体的骨结合。
5免疫组化检测:(1)种植术后第1个月检测结果:C组BMP-2阳性细胞数量较A、B组升高(P<0.05),A、B组间无明显差异(P>0.05);(2)种植术后第2个月检测结果:C组BMP-2阳性细胞数量较A组高(P<0.05),C组、B组间,A、B组间无明显差异(P>0.05);(3)种植术后第3个月检测结果:A、B、C组间BMP-2阳性细胞数量无明显差异(P>0.05)。这说明补骨胶囊在种植术后早期能提高种植体周围骨组织BMP-2的表达。
[结论]
1骨质疏松可使种植体结合骨板宽度,种植体周围的松质骨区骨量明显降低,影响早期种植体的骨结合。
2补骨胶囊早期能升高血清ALP浓度,钙磷乘积,促进骨质代谢及新生骨的形成。
3补骨胶囊可以使骨质疏松大鼠的种植体结合骨板宽度,种植体周围的松质骨区骨量,成骨细胞及BMP-2表达都有明显增加,有促进种植体骨结合的作用。