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四倍体细胞在胚胎组织发育过程中会出现严重偏离分布现象,因为在个体发育过程中,其仅能参与胚外组织的形成。将一定数量的ES细胞或iPS细胞与四倍体胚胎嵌合,在嵌合胚胎发育过程中,其胚外组织主要来源于四倍体细胞,而胚体完全由ES细胞或iPS细胞来源的细胞构成,这种技术被称为四倍体胚胎补偿技术。2009年我国科学家周琪等获得iPS四倍体补偿小鼠,在世界上首次证明了iPS细胞具有与ES细胞一样的多潜能性,为iPS技术的应用提供了坚实的理论基础。2009年我国在世界上率先获得了猪的iPS细胞。在理论上,利用猪iPS细胞通过四倍体补偿技术可以获得完全由iPS细胞发育而来的克隆猪。故此本研究对猪孤雌四倍体胚胎的制备方法进行了摸索,并将其在体外培养的条件进行了优化,最后对获得的孤雌四倍体胚胎的质量进行了检测,取得如下结果:1、在猪卵母细胞成熟培养20~22 h后,不添加激素的成熟液比添加激素的成熟液获得了更高的成熟率(68.8% & 60.7%),但无统计学差异(P>0.05);2、在PZM-3胚胎培养液中添加3 mg/mL BSA能提高孤雌激活的胚胎卵裂率和囊胚率(67.8%; 31.3%);3、在PZM-3胚胎培养液中添加10%血清组囊胚率和孵化囊胚率略好于不添加组(27.3% & 22.9%; 0.05% & 0.03%),但无统计学差异(P>0.05)。利用Hoechst 33342对添加血清组和不添加组囊胚细胞进行染色计数,结果显示,添加血清组的囊胚细胞核小、细胞数多,不添加血清组囊胚细胞核大、细胞数少;4、筛选猪孤雌激活2-细胞胚的电融合参数,结果显示:375/25×2(即电场强度为375 V/mm、脉冲时程为25μs的两次电脉冲)的电融合参数组合可以获得相对较好的融合率(92%)和卵裂率(62%);5、利用Real-time PCR和免疫荧光染色法检测猪孤雌四倍体囊胚中多能性因子的表达,结果显示猪孤雌四倍体囊胚中表达多能性基因nanog、oct4、sox2的mRNA,其表达量比孤雌囊胚低,但差异不显著,免疫荧光检测蛋白表达定位,发现这三个基因均表达并定位于囊胚细胞的细胞核;6、用显微注射法将猪iPS细胞分别注入2-细胞期、4-细胞期、6-细胞期、8-细胞期和桑椹胚期孤雌四倍体胚胎的卵周隙内,以及直接注射到孤雌四倍体囊胚腔中,在体外培养过程中均未确认嵌合现象。