内蒙古牙克石地区啮齿动物携带汉坦病毒分子流行病学调查研究

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目的:我国是肾综合征出血热病例报道最多的国家,在我国存在多个肾综合征出血热疫区。1955年,在内蒙古牙克石地区发现首例肾综合征出血热病人,随后疫情不断扩大,病例逐渐增多。1984年在牙克石建立疫情监测点,多年监测数据表明牙克石疫区的性质有所转换,我们利用分子生物学方法检测当地啮齿动物携带汉坦病毒情况,为更好地开展肾综合征出血热预防控制工作提供科学依据。  方法:在牙克石地区采用夹夜法捕获啮齿动物,利用形态学鉴定鼠种,现场解剖取其肺组织,迅速置于液氮中。利用间接免疫荧光(IFA)和RT-PCR技术,检测啮齿动物中HV自然感染情况及其基因型别,用MrBayesv3.1.2软件构建系统发生树分析与其他HV基因型之间的关系。同时,提取HV检测为阳性标本的总DNA,扩增Cytb基因。  结果:1)牙克石地区共捕获啮齿动物442只,经间接免疫荧光(IFA)检测,共发现6份黑线姬鼠鼠肺标本为HV抗原可疑阳性。阳性标本提取总RNA,Nested-PCR扩增L片段,所有阳性标本均未扩增到目的片段。  2)莫氏田鼠52只(经IFA检测未见阳性)、鼩鼱6只,采用RT-PCR方法进行检测。52份鼠肺标本提取总RNA,Nested-PCR扩增汉坦病毒L片段,共得到5条片段,均来自莫氏田鼠。核苷酸Blast结果显示为目的片段,设计引物扩增S、M片段。5份标本全部扩增到全S核苷酸序列和部分M核苷酸序列(Gc片段),其中2份扩增到全M序列。S基因片段由1848-1861个核苷酸组成,M基因片段由3662个核苷酸组成。同源性分析发现5株病毒与哈巴罗夫斯克病毒(KHAV)具有最高的同源性,S基因片段为92.5%-96.4%,M基因片段为88.9%-95.4%;但与其他型汉坦病毒的差异较大,S基因片段差异大于21.5%,M基因片段大于25.2%。用全S与全M的核苷酸序列构建系统发生树,这些病毒均与KHAV聚集在一起,构成一个独立的分支。另外,所有已知的KHAV病毒又可以分为两个小的分支,两个病毒分支之间的核苷酸差异大于5.3%。  3)阳性标本提取总DNA,PCR扩增线粒体Cytb基因(Cytochromeb),核苷酸序列比对结果与形态学鉴定结果一致,所有阳性标本均为同一鼠种,同为莫氏田鼠。构建系统进化发生树进行分析,5份阳性标本的Cytb基因与捕自俄国的莫氏田鼠的Cytb基因的进化关系最近。  结论:牙克石地区莫氏田鼠中汉坦病毒的携带率较高(9.62%),所携带的病毒均为KHAV,与俄罗斯远东哈巴罗夫斯克地区扩增到的病毒为同一基因型病毒。该结果支持莫氏田鼠是KHAV的自然宿主。捕获鼠类多为黑线姬鼠,但并未从标本中扩增到HTNV,推测牙克石地区的疫区性质可能已经发生改变,应加强对其他鼠类(如莫氏田鼠)和鼩鼱类动物的监测工作。
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