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猪繁殖与呼吸综合征病(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以妊娠母猪繁殖障碍及各年龄阶段猪呼吸道症状为主要特征的传染病，在猪体内主要感染猪肺泡巨噬细胞(Porcine alveolar macrophages，PAM)。与PRRSV感染相关的受体主要有唾液酸黏附素(Sialoadhesin，Sn)、CD163分子受体和硫酸乙酰肝素(Heparinsu1phate，HS)。其中Sn受体可以黏附PRRSV并介导PRRSV的内吞作用。本文通过原核表达Sn胞外区结构域重组蛋白及制备多克隆抗体，为研究结合PRRSV的Sn受体胞外区结构域的功能作用打下坚实基础。本试验从健康猪肺收集PAM细胞，提取PAM细胞总RNA，分析Sn受体基因胞外区结构域，发现其胞外区共有15个结构域，将其分成8段，用RT-PCR方法扩增出8个结构域的基因片段，大小分别为267bp、504bp、518bp、556bp、510bp、478bp、481bp、535bp，将这八个基因片段分别亚克隆到PUCM－T载体中，进行序列测定。利用DNAStar软件分析了八个结构域的拼接序列与Genbank上发表的Sn受体胞外区核苷酸序列的同源性，结果为99.2％～99.6％。根据唾液酸黏附素受体基因序列，设计了八对5’端带有EcoRⅠ酶切位点，3’端带有SalⅠ酶切位点的特异表达引物。根据设计的引物扩增出八段基因，大小分别为267bp、504bp、518bp、556bp、510bp、478bp、481bp、535bp。将所扩增出的基因片段分别亚克隆到原核表达载体pET32a中，构建了重组表达质粒PET-Sn1，PET-Sn2, PET-Sn3, PET-Sn4,PET-dSn5, PET-Sn6, PET-Sn7, PET-Sn8。其中将PET-Sn1， PET-Sn2, PET-Sn3在IPTG的诱导下成功表达，获得了分子量大小分别约为28KDa、42KDa、41KDa的重组蛋白rSn1、rSn2、rSn3、与预期的蛋白分子量相符；通过优化表达条件，大量表达重组蛋白，用尿素法对表达的蛋白进行纯化与复性。纯化重组蛋白经SDS-PAGE电泳鉴定，目的蛋白的纯度分别达到85％、85％、87％。用rSn1、rSn2、rSn3纯化蛋白分别免疫小鼠，制备抗重组蛋白rSn1、rSn2、rSn3的多克隆抗体，经间接ELISA检测，效价均达到1:12800。将特异性多抗做免疫印迹，结果显示制备的多抗可以与各自的重组蛋白特异性结合，表明表达的重组蛋白具有较好的免疫原性。