【摘 要】
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目的:食管癌是我国高发的恶性肿瘤之一。食管癌早期症状轻微,易错过最佳诊疗时期,因此绝大多数食管癌患者治疗情况仍不理想。为了突破食管癌预后差的现状,需进一步了解食管癌发生发展的细胞和分子机制。细胞叠套结构（cell-in-cell structures,CICs）是一个或多个入侵细胞主动钻入一个靶细胞后所形成的细胞套细胞的结构,常见于肿瘤组织中。入侵细胞最常见的命运是死亡,从而提示细胞叠套结构可能是
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目的:食管癌是我国高发的恶性肿瘤之一。食管癌早期症状轻微,易错过最佳诊疗时期,因此绝大多数食管癌患者治疗情况仍不理想。为了突破食管癌预后差的现状,需进一步了解食管癌发生发展的细胞和分子机制。细胞叠套结构（cell-in-cell structures,CICs）是一个或多个入侵细胞主动钻入一个靶细胞后所形成的细胞套细胞的结构,常见于肿瘤组织中。入侵细胞最常见的命运是死亡,从而提示细胞叠套结构可能是一个肿瘤发生发展的影响因素。本文通过对食管鳞癌组织标本中的细胞叠套结构的检测和分析,明确其与食管鳞癌患者临床信息的相关性。同时通过体外实验分析细胞叠套结构对肿瘤细胞生长的影响,探究其在食管癌发展进程中的生物学意义。方法:首先,收集食管鳞癌组织标本,石蜡包埋后制备4 μm厚的组织切片,同时购买食管鳞癌肿瘤组织芯片（tumormicroarray,TMA）。其次,用EML多重免疫荧光共染色（Epithelium-Macrophage-Leukocytes）对食管鳞癌组织切片和芯片进行染色,利用宽视野荧光活细胞工作站采集图像,计数细胞叠套数量,并计算细胞叠套密度。随后,利用斯皮尔曼相关系数法（Spearman rank test）分析细胞叠套密度与患者临床病理特征之间的相关性。利用Cox单因素和多因素回归分析,寻找患者总生存期的独立预后因素,同时利用Kaplan-Meier法绘制存活曲线,探索不同细胞叠套密度的患者间是否存在生存期差异。最后,通过葡萄糖“饥饿”处理和ROCK抑制剂Y27632,检测同质细胞叠套结构数量变化与食管鳞癌细胞体外生长的关系。结果:（1）在141例食管鳞癌肿瘤组织中,检测到5种细胞叠套结构,分别为肿瘤细胞间的同质细胞叠套结构（Tumor-in-tumor,TiT,CD45-/CD68-）、肿瘤细胞包裹白细胞（Leukocyte-in-tumor,LiT,CD45+/CD68-）、巨噬细胞包裹肿瘤细胞（Tumor-in-macrophage,TiM,CD45-/CD68+）、巨噬细胞包裹白细胞（Leukocyte-in-macrophage,LiM,CD45+/CD68+）和肿瘤细胞包裹巨噬细胞（Macrophage-in-tumor,MiT,CD68+/CD68-）。其中,TiT 是食管鳞癌组织中细胞叠套结构的主要类型,数量占比为78.0%;后四种为异质细胞叠套结构,占22.0%。（2）在141例食管鳞癌肿瘤组织中,下段食管鳞癌中LiM发生率较高（p<0.05）。（3）在141例食管鳞癌肿瘤组织中,TiT和细胞叠套结构总数（overall cell-in-cell structures,oCICs）的密度均与患者的良好预后正相关（p<0.05）。（4）在5种细胞叠套结构亚型中,TiT是一个独立的预后预测因素（hazard ratio=0.490,95%confidence interval=0.253-0.948,p<0.05）,且在 T 晚期或 TNM 晚期的患者中,TiT的预测能力更强（p<0.05）。（5）六种食管癌细胞系TE-8、YSE-2、KYSE-30、KYSE-70、KYSE-150和KYSE-410中细胞叠套结构形成率均较低。在葡萄糖“饥饿”处理后,KYSE-30细胞中的同质细胞叠套结构形成率增加。同时,KYSE-30中的同质细胞叠套结构被抑制后,其生长能力增强。结论:下段食管鳞癌中,巨噬细胞包裹白细胞形成的细胞叠套结构发生率较高,且肿瘤细胞间形成的同质细胞叠套结构密度与食管鳞癌患者的良好预后正相关,可能与细胞叠套结构抑制肿瘤细胞生长有关,提示细胞叠套结构可能在食管鳞癌的发展进程中发挥作用。图7幅,表9个,参考文献51篇。
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