Claviceps purpurea菌的分离及其代谢产物的研究

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麦角是由寄生在几百种植物上的Claviceps spp.产生的,Claviceps purpurea是Claviceps spp.中的典型代表。麦角中的麦角碱属于真菌毒素类吲哚衍生物家族,具有许多非常重要的生物活性。麦角碱被用来治疗偏头痛、帕金森疾病、催乳素瘤和减少产后出血等。Claviceps purpurea,Claviceps fusiformis, Claviceps paspali都是麦角碱产生菌,它们能够产生不同种类的麦角碱。Claviceps paspali能够产生麦角酸衍生物;Claviceps fusiformis产生棒麦角碱;只有Claviceps purpurea能够产生麦角肽类物质。目前国内对Claviceps purpurea研究很少,且麦角碱研究所用菌种多从国外获得。论文中对藏牧区黑麦麦角菌核、乌克兰黑麦麦角菌核及俄罗斯黑麦麦角菌核中的有效成分进行研究,通过TLC及ESI-MS分析,推断这几种麦角菌核中含有麦角肽类物质。本研究尝试从藏牧区黑麦麦角菌核、乌克兰黑麦麦角菌核及俄罗斯黑麦麦角菌核中分离具有产麦角生物碱能力的菌株。利用摇瓶筛菌方法,从305株菌中筛选到38株具有产碱能力的菌株。在A50菌株平板上发现一株紫色菌株。随后对该紫色菌株进行紫色性状遗传稳定性和产碱稳定性考察,筛选得到具有稳定产碱能力的紫色菌株——A50-1。利用26S rDNA D1/D2区域序列和ITS序列对其进行菌种鉴定,确定分离得到的菌株为Claviceps purpurea。本研究从A50-1菌株的发酵代谢产物分离得到三个化合物,通过显色反应、TLC、 ESI-MS及1HNMR分析发酵产物,最终判断产物zp-2-160-2为麦角新碱,zp-2-12-1为麦角克碱,并且推测出zp-2-160-1可能的化学结构。对A50-1菌株进行发酵条件研究,确定其最适种子培养基为M2培养基,发酵培养基为SC培养基。利用钴60物理诱变方法对A50-1菌株进行诱变,得到6种不同形态的菌株。对这6种菌株进行发酵培养,确定了菌株的产碱谱系与菌株形态之间的关系。利用RAPD技术对这几种菌株进行分析。实验中对RAPD反应体系条件和扩增程序均进行优化,确定了适合本实验的PCR反应条件和扩增程序。根据RAPD-PCR扩增结果,计算出了菌株之间的相似性系数,并用UPGMA构建了聚类分析树状图。
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