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严重创伤或失血性休克(hemorrhagic shock, HS)后常出现肠屏障功能障碍,表现为肠上皮通透性出现增高,引起肠道细菌移位(bacterial translocation, BT)和肠源性脓毒血症,甚至导致全身炎症反应综合征(systemic inflammatory respone syndrome, SIRS)和多器官功能障碍综合征(multiple organ disfunction syndrome, MODS),危及患者生命。基础研究表明,肠上皮细胞间的紧密连接,选择性的调节分子和离子从细胞间通过肠上皮,在肠上皮通透性和肠屏障功能的调节中有重要作用,紧密连接功能主要取决于由一系列结构蛋白。在失血性休克后,肠屏障功能障碍与紧密连接的重要结构蛋白闭锁连接蛋白-1 (zonula occludens-1, ZO-1)表达降低和从紧密连接蛋白复合体解离有关;高脂肠内营养可防治失血性休克后的ZO-1蛋白丢失,保护肠屏障功能。在人微血管内皮细胞,免疫沉淀发现,ZO-1可结合一种作为屏障功能重要调节靶点的磷酸化蛋白,这种磷酸化蛋白就是血管扩张刺激磷蛋白(vasodilator-stimulated phosphoprotein, VASP),VASP最早发现于血小板,是一种黏着斑的结合和调节蛋白。在内皮细胞中,VASP可受PKA磷酸化Ser-157位点后,改变与ZO-1的结合,从而调节内皮细胞的屏障功能。由于肠上皮细胞(intestinal epithelial cell, IEC)也表达VASP蛋白,VASP磷酸化在失血性休克后的肠屏障功能障碍中有何作用,机制如何,是否与ZO-1有关?方法:本实验采用失血性休克大鼠模型,以血清二胺氧化酶(diamineoxidase, DAO)活性、血浆D-乳酸含量以及肠粘膜上皮组织形态反映肠粘膜屏障功能,研究VASP磷酸化在失血性休克后肠屏障功能障碍中的作用和调节机制:1. VASP磷酸化在失血性休克后肠屏障功能障碍中的作用(1)观察失血性休克后大鼠肠屏障功能的变化,肠粘膜组织VASP、磷酸化VASP(Ser-157)蛋白表达的变化,分析休克后VASP及磷酸化VASP蛋白表达变化与肠屏障功能变化的关系。(2)观察PKA激动剂cAMP(可磷酸化VASP的Ser-157位点)对失血性休克后大鼠肠屏障功能的影响,阐明VASP磷酸化在失血性休克后肠屏障功能障碍中的作用。2. VASP磷酸化调节失血性休克后肠屏障功能障碍与ZO-1的关系(1)观察失血性休克后大鼠肠粘膜组织ZO-1蛋白表达的变化,分析休克后ZO-1蛋白表达变化与肠屏障功能变化的关系。(2)观察cAMP对失血性休克大鼠肠粘膜组织ZO-1蛋白表达的影响,分析VASP磷酸化调节失血性休克后肠屏障功能的可能机制。结果:1.与正常对照相比,失血性休克后大鼠血清DAO活性、血浆D-乳酸含量增高,休克1h增高幅度较小,休克2h和4h增高幅度较大(P<0.01),肠粘膜上皮组织形态显示明显的损伤改变;失血性休克后肠粘膜组织的VASP蛋白表达逐渐降低(P<0.01),磷酸化VASP(Ser-157)表达增高(P<0.01),但增高幅度从休克2h开始降低。cAMP可增高休克2h肠粘膜组织的磷酸化VASP(Ser-157)表达(P<0.01),同时降低休克2h大鼠血清DAO活性、血浆D-乳酸含量,减轻肠粘膜上皮组织形态的损伤改变。2.与正常对照相比,失血性休克后肠粘膜组织的ZO-1蛋白表达逐渐降低(P<0.01),与休克2h组相比,cAMP可增高休克2h的肠粘膜组织ZO-1蛋白表达(P<0.01)。结论:VASP磷酸化是失血性休克大鼠肠屏障功能损伤的重要相关因素,可能通过紧密连接蛋白ZO-1,参与休克后肠屏障功能障碍的调节。