【摘 要】
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目的：应用siRNA分子干扰技术沉默ERK5基因,比较ERK5基因沉默前后流体剪切力(Fluid shear stress, FSS)对MC3T3-E1成骨细胞BMP2, BMP7蛋白的表达影响,并探讨ERK5信号通路在其中
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目的：应用siRNA分子干扰技术沉默ERK5基因,比较ERK5基因沉默前后流体剪切力(Fluid shear stress, FSS)对MC3T3-E1成骨细胞BMP2, BMP7蛋白的表达影响,并探讨ERK5信号通路在其中的作用。方法：将加载不同干预措施的MC3T3-E1成骨细胞分成四组,第一组,空白组；第二组FSS组；第三组,ERK5沉默(siERK5)组；第四组,FSS+siERK5组。利用不同浓度的ERK5siRNA干预MC3T3-E1成骨细胞的ERK5基因,实时荧光定量PCR检测ERK5基因的表达情况,筛选转染MC3T3-E1成骨细胞的ERK5siRNA的最佳浓度。然后采用生理强度为12dyne/cm2的流体剪切力加载MC3T3-E1成骨细胞,应用实时荧光定量PCR和Western blot印迹法检测四组成骨细胞BMP2, BMP7mRNA和蛋白的表达。结果：采用浓度为：20nmol/L、40nmol/L、60nmol/L和80nmol/L的ERK5siRNA转染成骨细胞24h后发现：当ERK5siRNA浓度为6Onmol/L干预MC3T3-E1成骨细胞后,与空白组相比ERK5mRNA的表达下降最为显著,ERK5mRNA的沉默率为76.8±2.2%(P<0.05)。加载流体剪切力45分钟后,MC3T3-E1成骨细胞的BMP2/BMP7mRNA和蛋白的表达明显升高(P<0.05),但该种反应能够被ERK5信号通路阻断(P<0.05)。结论：ERK5信号通路能有效抑制流体剪切力介导的MC3T3-E1成骨细胞BMP2,BMP7的表达,在成骨细胞增殖和分化过程中起到重要作用。
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