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目的：探讨人诺如病毒(Norovirus,NoVs)非结构蛋白NS6的体外蛋白酶切活性,筛选与人诺如病毒非结构蛋白NS6相互作用的宿主细胞内的蛋白,为解析NoVs的感染及致病机制提供基础. 方法：(一)构建带有his标签的GII.P4NoVs NS6基因原核表达质粒,将重组质粒转化到BL21的感受态细胞中,经IPTG诱导表达、镍柱纯化及分子筛层析获取目的蛋白,并经蛋白印迹试验(Western Blotting)确定;通过SDS-PAGE观察原核表达的GII.P4NoVs NS6对15VP1-6P的酶切活性.(二)构建诺如病毒NS6等非结构蛋白的真核重组表达质粒,转染293T细胞,通过Western Blotting检测诺如病毒非结构蛋白的表达,应用免疫沉淀和质谱技术鉴定与NS6相互作用的宿主细胞内蛋白,使用Unique Peptide≧2的规则及分子量大小筛选并分析高可信度的结合蛋白. 结果：(一)含有GII.P4NoVs NS6蛋白的重组表达质粒pDE1-NV-NS6在大肠杆菌中成功表达可溶性的目的蛋白,亲和层析并浓缩后的目的蛋白含量为16.7mg/ml;二步纯化后的目的蛋白纯度达95%以上.在37℃的条件下,目的蛋白GII.P4NoVs NS6具有酶切15VP1-6P蛋白的活性,但酶切效率低于鼻病毒3C蛋白.(二)利用pCAGGS载体成功构建GII.P4NoVs NS12、NS3、NS4、NS5、NS6和NS7非结构蛋白基因的6个真核表达质粒,Western Blotting表明上述质粒转染的293T细胞中有与预期大小相符的目的蛋白.免疫沉淀和质谱鉴定发现106个与NS6相互作用的细胞内蛋白,筛选得到4个高可信蛋白,分别为：神经节苷脂GM2激活剂蛋白、γ谷氨酰环化酶、载脂蛋白LCN1和ADP核糖基化因子样蛋白1. 结论：(一)本研究利用原核表达体系体外成功获得高纯度的GII.P4NoVs NS6非结构蛋白,该蛋白具有酶活性,为深入探讨该蛋白在病毒感染和致病中的生理意义奠定了基础.(二)本研究利用质谱分析鉴定出4个与GII.P4NoVs NS6相互作用的宿主细胞内蛋白,为深入开展诺如病毒和宿主细胞相互作用的研究奠定了基础.