猪伪狂犬病(Rseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Rseudorabies virus,PRV)引起的多种家畜及野生动物共患的急性,热性传染病,以呼吸困难和精神紊乱为主要特征。伪狂犬病病毒属于疱疹病毒科,α-疱疹病毒亚科,水痘-带状病毒属。临床上PRV感染以新生仔猪神经紊乱、死亡、成年猪呼吸困难、母猪繁殖障碍为特征,给养殖业带来严重的经济损失。自2011年以来,高致病力的PRV在我国猪群中出现,给该病的防控带来了新的挑战。UL19蛋白为PRV衣壳蛋白的主要成分,与病毒基因组紧密结合形成核糖体蛋白,且与病毒在宿主细胞内转运有关,同时还在蛋白组装、基因组进入核内等方面发挥着不可替代的作用。伪狂犬病毒具有潜伏感染特征,剂量适中即可以在其天然宿主猪的三叉神经节中潜伏,且不产生裂解性感染,一旦宿主免疫力降低,即可激活病毒产生急性感染。为了更好的研究PRV在神经细胞中潜伏的状态,制备了 UL19单克隆抗体,对研究病毒在细胞中状态和传递示踪建立良好的操作平台,以便更好的研究潜伏感染中病毒粒子所处的状态。同时UL19参与PRV在宿主细胞内的入侵、复制、转运及潜伏感染机制等,可以分析感染该蛋白在细胞中的分布,也可以将其作为病毒载量内参,定量病毒其它蛋白在不同时间段的量,为进一步研究病毒在感染细胞中病毒载量提供定量标准。本研究应用PCR技术扩增了 PRV UL19基因片段,将目的基因连接到pCold-TF中构建重组原核表达质粒pCold-TF-UL1 9并通过IPTG诱导表达和纯化。以纯化的PRV UL19蛋白为抗原免疫小鼠,三免后进行细胞融合,后继续亚克隆培养,筛选单克隆抗体细胞。以此建立了检测PRV抗原的间接ELISA方法,用于筛选杂交瘤细胞株。结果:采用PCR方法可有效地扩增PRV UL19基因片段,其大小为1 653 bp;同时成功地构建了 pCold-TF-UL1 9表达载体,经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE及Western blot可分析出该重组蛋白大小约为110kDa,且主要以可溶性方式表达。采用间接ELISA方法初步筛选出四株杂交瘤细胞株,杂交瘤细胞株经有限稀释法继续培养,再经Western blot鉴定,获得一株分泌稳定且特异性强的单克隆抗体细胞株,并将其命名为3D8。本研究成功地克隆和表达出PRV UL19,并以重组表达蛋白PRV UL19建立了间接ELISA检测方法,同时以重组蛋白免疫小鼠后制备出抗PRVUL19单克隆抗体细胞株,为研究病毒在细胞中状态和传递示踪建立良好的操作平台,也为该病的控制提供重要的手段。