【摘 要】
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葡激酶(staphylokinase，SAK)是由金黄色葡萄球菌(staphyloccusaureus)分泌的一种含136个氨基酸残基的胞外蛋白质。采用PCR方法，从金黄色葡萄球菌中获得了葡激酶(staphylokinase
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葡激酶(staphylokinase，SAK)是由金黄色葡萄球菌(staphyloccusaureus)分泌的一种含136个氨基酸残基的胞外蛋白质。采用PCR方法，从金黄色葡萄球菌中获得了葡激酶(staphylokinase，SAK)基因，利用T／A克隆将SAK基因转入到pUCm-TVector中。用限制性酶Not I和Bam HI双酶切绿色荧光蛋白真核载体pEGFP-NI和含有SAK基因的pUCm-T Vector，分别得到线型pEGFP-NI基因和SAK基因，并且其都具有Not I和BamH I限制性酶酶切末端。用T4连接酶连接着两个线型基因，重新构建了SAK基因真核载体，并转化JM 109细胞，筛选阳性克隆。把重组质粒转化Hela细胞，对转化后的细胞经超声破碎，离心上清和沉淀物进行SDS-PAGE和Western blot。
发现重组质粒在细胞内表达了葡激酶蛋白，并且SAK蛋白主要是以可溶状态存在于细胞内。
用热血浆琼脂糖检测重组质粒表达的SAK蛋白活性，发现接种周围有明显的溶解圈，证明了SAK蛋白具有生物活性。
在没有饲养层细胞存在的情况下，通过加入细胞因子观查胚盘细胞发育变化，发现在细胞因子作用下可以延缓胚盘细胞的分化，并可以形成更多的胚盘细胞群，为建立原生殖细胞系进行了初步探索。
通过脂质体介导，把基因转化到：PGCs内，进行体外培养。随着PGCs发育，SAK基因在PGCs内表达。这对用真核细胞生产SAK有重要意义。
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