IL—16基因编码一个631aa的前体蛋白（Pro—IL—16），它被胱冬氨酸酶（Caspase 3）切割加工后，C末端的121aa肽段具目前已知的IL—16全部生物活性。IL-16可引起CD4+T细胞迁移、活化和增殖。作为一种新发现的细胞因子，作为一种新的细胞因子，IL—16的功能不是十分清楚，对它的研究还远远没有深入。但是天然的IL—16在血液中含量极低，约为10-9M，不易大量制备，限制了它的研究和利用。因此，克隆表达得到重组的IL—16蛋白，是十分必要的。以往的研究还远不深入。 用RT—PCR方法将人IL—16基因的活性区段（783—1187bP）克隆至pBluescript SK（+）载体，测序验证后，克隆至原核表达载体pT7—7His，并在大肠杆菌中进行了高效表达。表达产物为可溶性蛋白，分子量约为18kD，通过Ni+离子亲和层析一次性纯化。Western blot检测证实其具IL—16免疫原性，FACS检测证实该rhIL—16具促CD4+细胞增殖活性。 本实验以重组及真核表达的IL—16，处理转染了含HIV启动子质粒的Jurkat细胞，其表达水平可通过HIV启动子后连接的CAT报告基因的表达水平进行检测。结果表明，无论重组IL—16或真核IL—16，对HIV启动子，均有抑制效果，但不十分显著。 本文工作选择具有CD4表面分子的白血病细胞株Jurkat E6—1，作为靶细胞，以100倍浓度递增的IL-16处理24hr。通过细胞计数，MTT，FACS检测互相验证，表明IL—16的加入，会影响细胞的增殖。在低浓度下(10-9M，10-7M)不明显改变靶细胞的生长状况；在高浓度下(10-5M)，靶细胞的生长受到明显抑制，表现出IL—16在此间的促凋亡效果。 本文对凋亡可能涉及的基因进行了初步的探讨。结果表明，在无血清培养Jurkat细胞24hr后，随着rhIL—16浓度的增加，Jurkat细胞的凋亡程度也增加，与之相应，Bid和C一MyC的表达水平也增加，这表示BdC－M厂可能参与IL叫6诱导的扣水Ct细胞凋亡的调节。但是，同样培养条件下，F。L．q在对照和低浓度处埋下有表达，高浓度处理后并不表达。 CD4分子与IL叫6结合后。会介导该信号的传递，因此，本文对其下游可能涉及的信号传导途径的主要分子进行了初步分析。它们分别是皿C、PKA、M仇怅途径中的三个代表：＊RK途径中的 IVthKI；SAPK／JNK途径中的 NI：15KICI；p38途径中的 p38。 结果表明，加入 PKC的抑制剂，强烈抑制了所有浓度＊－16处理下细胞的增殖，暗示PKC在u一16与CD4结合后，可能传递了增殖相关信号，它的存在是Jllrk盯细胞的生长增殖必须的。结果表明，力。入 PKA才制剂 H89，与不同浓度的rhll－16共处理 jurku细胞 24小时后，细胞数目均表现为增力。。其中，10－’M rhll—16处理的增殖效果最为明显。这说明尸KA可能参与对IL－仍诱导Jurk吐细胞的调节，但是调节的方式还不清楚。 结果表明，加入 Nil3KI特异性抑制剂 PD 98，059，对以＊’M。10’M、10’M和 10－‘M浓度的 rlL－16处理下的 ＊。hat，兰月增殖程度大幅度提高。 用RT—P口又方法对SA PK途径中的mKKI 进行检测，结果表明，不同剂量IL一工6作用于靶细胞2斗fir，都明显诱导fi4lZKI＜1的表达，而作用时间延长到48k，IL—16对它的诱导作用消失。P38也是 MAPK(Mltogen一。ctivat。d Protein inas4亚家族成员‘’‘’。IL一16东激后，会在HAC－12P5(CD4”巨嗜细月株冲，弓起p38 MAPK的磷酸化‘’。抑制剂实验结果证实，它对 IL—16诱导凋亡的效果是不显著的。