论文部分内容阅读
研究目的1 明确蛋白酪氨酸磷酸酶 D(Protein tyrosine phosphates receptor type delta,PTPRD)基因在人肝癌细胞中的抑癌活性。2阐明PTPRD基因调控磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶 B(Proten kinase B,PKB/Akt)-雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)途径影响人肝癌细胞增殖和迁移的分子机制。3为寻找肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)新的遗传标记物和肝癌治疗的新靶点提供新思路。研究方法1采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测人正常肝细胞(L02)和肝癌细胞株(HepG2和HuH-7)中PTPRD基因的mRNA和蛋白表达水平。2采用PTPRD基因过表达腺病毒和shRNA-PTPRD慢病毒分别转染构建PTPRD基因过表达和沉默的稳定人肝癌细胞系,然后采用MTT和细胞划痕实验分别检测PTPRD基因表达水平的变化对人肝癌细胞增殖和迁移的影响。3采用Western blot检测PTPRD基因过表达和沉默的稳定人肝癌细胞系中蛋白激酶b(Akt)、磷酸化蛋白激酶b(Phosphatase-proten kinase b,p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(Phosphatase-mammalian target of rapamycin,p-mTOR)的蛋白表达水平。研究结果1与人正常肝细胞L02相比,人肝癌细胞(HepG2和HuH-7)PTPRD基因的mRNA和蛋白水平均较低(P<0.05)。2 PTPRD基因过表达的HepG2和HuH-7肝癌细胞系构建成功。与阴性对照组相比,PTPRD基因过表达两种肝癌细胞系(HepG2和HuH-7)细胞的增殖和迁移明显受到抑制(P<0.05);仅PTPRD基因沉默的HepG2细胞系构建成功,PTPRD基因沉默后的HepG2细胞较阴性对照组细胞的增殖和迁移均上升(P<0.05)。3与阴性对照组相比,PTPRD基因过表达的两种肝癌细胞系(HepG2和HuH-7)中Akt和mTOR蛋白的表达均无统计学意义,p-Akt和p-mTOR蛋白的表达均明显降低(P<0.05),反之,PTPRD基因沉默的HepG2细胞中Akt和mTOR蛋白的表达也均无统计学意义,p-Akt和p-mTOR蛋白的表达均明显上升(P<0.05)。研究结论1 PTPRD基因可能是肝癌的抑癌因子。2 PTPRD基因可能通过调控PI3K-Akt-mTOR信号通路,影响人肝癌细胞增殖和迁移。