Sombati癫痫细胞模型及红藻氨酸致痫大鼠模型海马中高迁移率族蛋白1表达变化的研究

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第一章Sombati癫痫细胞模型中高迁移率族蛋白1表达变化的研究【目的】研究Sombati癫痫细胞模型中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的变化规律,探讨体外培养的癫痫细胞模型中HMGB1的变化。【方法】新生SD乳鼠,断头后迅速钝性分离出双侧海马,海马神经元体外培养至第9天,将神经元随机分为模型组(无镁细胞外液处理)和对照组(正常细胞外液处理),用Western-blot技术检测海马神经元在接受相应处理12h、24h、72h后HMGB1蛋白的表达变化情况。【结果】Western-blot显示,在神经元接受相应处理后12h、24h,模型组细胞所含的HMGB1的量都低于对照组(P<0.05);在72h,模型组的表达量明显高于对照组(P=0.006,P<0.05)。模型组HMGB1的蛋白表达量于造模后12h(0.2477±0.11810)、24h(0.3331±0.21602)、72h(0.8570±0.25280)呈现逐渐增高趋势。【结论】Sombati癫痫细胞模型中HMGB1的表达呈时间依赖性,痫性发作12h至72h,其表达量随着癫痫发作时间的延长而增高,HMGB1可能在癫痫的病理生理中起重要作用。第二章红藻氨酸致痫SD大鼠模型海马区HMGB1表达变化的研究【目的】探讨红藻氨酸致痫大鼠海马区HMGB1表达的变化情况,以了解癫痫大鼠体内海马区HMGB1的表达变化趋势与体外培养的海马癫痫细胞模型HMGB1的表达变化的异同。【方法】将40只220–240g的SD雄性大鼠随机分为两组,模型组和对照组,模型组和对照组再各随机分为两组,每组10只,分别为24h组、72h组。模型组以红藻氨酸(KA)经侧脑室注入以诱发大鼠癫痫模型,对照组以等体积的生理盐水代替红藻氨酸。造模后分别于24h和72h处死大鼠,用HE染色法了解红藻氨酸致痫大鼠海马神经元的形态改变,用免疫组织化学技术来检测大鼠海马区HMGB1表达的量和位置改变。【结果】红藻氨酸致痫大鼠海马区神经元排列稀疏、混乱,胞核浓缩,细胞轮廓模糊,而对照组未观察到类似的形态改变。造模后24h,模型组中HMGB1的含量(0.1398±0.01801)明显低于对照组(0.2154±0.02873)(p=0.000),而在72h,模型组HMGB1的含量(0.3652±0.08330)则高于对照组(0.2354±0.00836)(p=0.012);在这两个时间点观察到的HMGB1蛋白均出现在海马神经元胞质中。【结论】动物实验的结果类似于体外培养的癫痫细胞模型实验的结果,红藻氨酸致痫大鼠成模后72h,海马区HMGB1出现在海马神经元胞质中且表达增高。
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