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目的：构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)细胞毒素相关基因A(Cytotoxin associated gene A, CagA)和空泡细胞毒素(Vacuolating cytotoxin A, VacA)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白,为检出幽门螺杆菌致病株和运用于临床检测Hp的感染奠定基础。方法：挑选CagA基因和VacA基因的优势抗原表位片段,收集H. pylori标准株NCTC11639,提取基因组DNA, PCR扩增目的基因片断,将其分别克隆到克隆载体pGEM-T和pMD18-T载体并测序,构建重组质粒pGEM-T/CagA和pMD18-T/VacA,将鉴定正确的重组质粒进行双酶切,把目的基因克隆入表达载体pET-16b,构建重组表达载体pET16b/CagA与pET16b/VacA。转化至大肠杆菌E. Coli Rosetta后诱导表达,经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化,并透析复性后,ELISA法检测重组蛋白CagA、VacA的免疫原性。结果：PCR扩增结果表明分别得到了大小约为1962bp和2256bp的目的片段；构建的重组质粒经酶切鉴定和测序证明其中插入片段分别为CagA和VacA的目的基因,测序结果与Genbank上登录序列比对后,结果完全一致；SDS-PAGE分析显示,在IPTG诱导下,重组工程菌表达了一相对分子量(Mr)约为75KDa和87KDa的目的蛋白条带,表达量占细菌总蛋白的20%,镍亲和层析纯化率约90%；目的蛋白在菌体细胞内主要以可溶性蛋白和包涵体形式存在,经间接ELISA法检测重组蛋白CagA、VacA具有一定免疫原性。结论：成功构建了pET16b/CagA、pET16b/VacA2个原核表达重组体,将其分别转化至大肠杆菌后,分别表达出了相对分子量(Mr)约为75KDa和87KDa的CagA和VacA重组蛋白,间接ELISA法检测重组蛋白CagA、VacA具有较好的免疫反应性,其中CagA蛋白的免疫反应性较VacA的强些,为H.pylori蛋白质疫苗的研制和以基因工程抗原为基础快速诊断试剂盒的研究打下了基础。