【目的】通过体外诱导耐药建立人肺腺癌A549细胞系的培美曲塞耐药细胞株,检测其在生物学特性方面与亲本株的差异,并进一步研究其耐药性发生与HER2/neu和HER4基因mRNA表达之间的关系。【方法】通过高浓度反复间歇诱导法建立A549的培美曲塞耐药细胞系。CCK8法检测细胞增殖,测定细胞耐药性,绘制生长曲线,计算倍增时间；流式细胞术法检测细胞周期分布及细胞凋亡水平；实时荧光定量PCR法检测耐药株及亲本株HER2/neu和HER4的mRNA表达。【结果】历经6个月建立了耐药指数为6.7倍的培美曲塞耐药的A549/PEM细胞系,其较亲本株的倍增时间延长(33.5±1.71h vs27.1±1.15h)；流式细胞术检测结果示：与亲本株比较,A549/PEM处于G1期的细胞比例增加(66.03±1.61%vs57.92±1.73%),S期细胞比例降低(30.05±1.25%vs37.51±1.31%),差别均有统计学意义(P<0.05)；在高浓度的PEM作用24h后,检测A549与A549/PEM细胞凋亡率分别为23.52%和10.99%,差别有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果示：A549/PEM较亲本株HER2/neu与HER4基因的mRNA表达水平分别增高100.3%和91.8%,差别均有统计学意义(P<0.05)。【结论】培美曲塞耐药的肺腺癌A549/PEM细胞与亲本株的生物学特性有差别；肺腺癌培美曲塞继发性耐药的产生可能与HER2/neu和HER4表达上调有关。