【摘 要】
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[背景与目的]新型冠状病毒传染病是2019年发现并暴发的重大传染病。它严重影响我国乃至世界经济、社会发展。在新型冠状病毒疫情下,全世界感染甚至死亡人数每天都会发生。我国实施有效的防疫政策以及对疫苗研发的重大投入与全民免费接种政策让我国疫情得以快速控制。然而,疫情在国外迅速蔓延,全球许多国家被新型冠状病毒疫情所波及,疫苗远远供不应求。甚至,全球各地报告的新型冠状病毒变体不断出现,包括传染力极强的德尔
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[背景与目的]新型冠状病毒传染病是2019年发现并暴发的重大传染病。它严重影响我国乃至世界经济、社会发展。在新型冠状病毒疫情下,全世界感染甚至死亡人数每天都会发生。我国实施有效的防疫政策以及对疫苗研发的重大投入与全民免费接种政策让我国疫情得以快速控制。然而,疫情在国外迅速蔓延,全球许多国家被新型冠状病毒疫情所波及,疫苗远远供不应求。甚至,全球各地报告的新型冠状病毒变体不断出现,包括传染力极强的德尔塔株、奥密克戎株等这些变体导致的全球疫情二次暴发。在我国,仍然有部分人被这些变体感染。以新型冠状病毒变异株引起的疫情又有卷土重来的迹象。所以,为了应对全球疫苗不公以及新型冠状病毒突变,我们将设计研发一种生产工艺简单、再组装能力强的有效的纳米疫苗。它将以刺突蛋白的S1亚基和包膜蛋白拼接形成融合蛋白,并包覆在PLGA纳米粒上。[方法]在NCBI基因文库中找到SAR-Co V-2的基因组序列,挑选其中S1序列与E序列用Linker进行拼接成S1-E序列。将设计的S1-E序列进行生物信息学分析,主要是疏水性、抗原表位、三级结构预测。合成S1-E序列并且构建S1-E p ET-28a（+）重组质粒并进行转化、克隆和质粒提取。将提取的质粒验证后转入感受态细胞Rosetta（DE3）经IPTG诱导表达重组S1-E蛋白,并纯化该蛋白。用双乳蒸发法将重组S1-E蛋白包被在PLGA纳米粒上制成S1-E-PLGA纳米疫苗,并对纳米疫苗的表征进行检测。免疫小鼠并评价重组S1-E蛋白、S1-E-PLGA纳米疫苗的免疫效果。[结果]带有S1-E序列的重组质粒被成功构建并且重组S1-E蛋白在原核表达系统中成功表达,蛋白大小在50k Da左右。S1-E-PLGA纳米疫苗在扫描电镜下呈现球形,载药量为8.8,包封率为63.6%,粒径分布在670±145 nm,Zeta电位为-22.3±6.89m V。重组S1-E蛋白、重组S1-E蛋白+弗氏佐剂、S1-E-PLGA纳米疫苗分别接种于BALB/c小鼠后,相比于对照组,产生抗S1、E抗体和有效抗体有显著升高（P＜0.05）。并且结果显示S1-E-PLGA产生的抗体滴度比重组S1-E蛋白+弗氏佐剂更高（P＜0.05）。经过重组S1-E蛋白刺激后,各组IL-2、TNF-α阳性的T细胞百分率均高于对照组（P＜0.05）。同时,小鼠的精神状态和体重增长均正常（P＞0.05）。[结论]重组S1-E蛋白、S1-EPLGA纳米疫苗能够刺激小鼠产生免疫应答;重组S1-E蛋白、S1-EPLGA纳米疫苗能够产生SARS-Co V-2中和抗体;PLGA作为疫苗递送载体在增强免疫效果上更优于弗氏佐剂。
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