皱盖疣柄牛肝菌培养基优化及其氨基酸、ITS序列比较分析

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牛肝菌目(Boletales)在大型真菌界占有极为重要的地位,它隶属于担子菌门(Basidiomycota),伞菌纲(Agaricomycetes),下辖牛肝菌科(Boletaceae)、松塔牛肝菌科(Strobilomycetaceae)等二十科。该目真菌多可食用。在中国发现并描述的具菌管或具菌褶的牛肝菌目(Boletales)的种类约397(含变种),可食用的199种。云南牛肝菌资源丰富,报道有224种,可食用的114种,占全国的72%。牛肝菌味道鲜美,深受国内外欢迎,因大量出口欧美,已成为云南一大支柱产业。牛肝菌在自然条件下与高等植物共生,目前尚难以人工培养。近年来随着社会需求的增长,商业化采收规模的扩大及气候因素如干旱的影响,牛肝菌产量逐年下降,价格不断上涨。因此重视及加快牛肝菌纯培养及其它相关的基础研究是保证牛肝菌可持续利用的关键。皱盖疣柄牛肝菌是云南牛肝菌的主要品种之一,本文以其为主要研究对象,对它的菌丝体诱导,鉴定及优化培养进行了研究,同时对它的氨基酸含量及ITS序列与其它种进行了比较分析。主要研究结果如下:  1.利用ITS分子标记,对已分离的菌丝体进行了鉴定,表明子实体和菌丝体序列完全相同,长度均为606bp,说明分离的菌丝体来源于皱盖疣柄牛肝菌子实体。  2.结合正交实验,从碳源、氮源、PH三方面对菌丝体基础培养基进行了优化,结果表明皱盖疣柄牛肝菌菌丝体培养较适宜的C、N、PH组合为2%葡萄糖+0.16%氯化铵+PH5.5。  3.通过天然物质的添加,进一步优化及改良了菌丝体培养基,结果表明,培养基中加入15%麦麸皮、10%生境土或5%松针粉,都能显著促进菌丝体的生长。因此优化培养基为:马铃薯200g、葡萄糖20g、NH4Cl1.6g、MgSO41.0 g、CaCl21g、KH2PO40.5 g、VB1100μg、麦麸皮150g(生境土100g或松针粉50g),琼脂10g,补水1L,PH5.5。  4.将皱盖疣柄牛肝菌及其它9种云南市场上主要出售的牛肝菌进行了氨基酸测定,并与两种人工菌(香菇及平菇)进行了比较,结果表明,皱盖疣柄牛肝菌等十种野生菌的氨基酸总量以及必需氨基酸的含量都高于两种人工菌;将皱盖疣柄牛肝菌子实体与其菌丝体氨基酸进行了比较,表明菌丝体的氨基酸总量有所下降,但必需氨基酸的总量下降不多,二者的必须氨基酸比例非常接近。  5.以黄磷鹅膏为外类群,将皱盖疣柄牛肝菌与分属于牛肝菌属(Boletus)及绒盖属(Xerocomus)的其他5种常见牛肝菌进行了ITS序列分析。结果表明,牛肝菌属的4个种在D=0.075处聚为一枝,Leccinum、Boletus、xerocomus三个属在D=0.095处聚类,他们的亲缘关系很近;6个牛肝菌种的碱基突变位点主要在ITS1及ITS2,5.8S区相对保守,很少有碱基变异。
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