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中文摘要背景与目的高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)是一种DNA结合蛋白,组织损伤后释放至胞外,招募多种类型干细胞,参与受损组织修复。造血干细胞移植(haematopoietic stem cell transplantation ,HSCT)的预处理必然导致骨髓组织受损,释放HMGB1,推测其可能参与造血重建。本实验将首次观察预处理后骨髓基质细胞HMGB1的释放、HMGB1对人脐血造血干细胞归巢和增殖分化的影响,并对其机制予以探讨;以期为促进HSCT术后造血重建寻找新靶点。方法体外培养人骨髓基质细胞,加速器照射后,利用ELISA方法检测培养上清中HMGB1含量的变化。利用MACS系统分选人脐血CD34+细胞,HMGB1与其共培养6天,通过流式细胞术检测脐血CD34+细胞分化指标(CD13、CD14、CD11c、CD41,CD71)的变化。利用克隆形成实验观察HMGB1与对造血干细胞增殖分化的影响。应用transwell小室趋化装置观察HMGB1对人脐血CD34+细胞的迁移活性的影响。流式细胞术检测HMGB1的受体RAGE、TLR2和TLR4在人脐血CD34+细胞上的表达。利用抗-RAGE抗体、抗- TLR2抗体和抗- TLR4抗体阻断RAGE、TLR2和TLR4,重复趋化实验,体外观察RAGE、TLR2和TLR4是否参与HMGB1可能诱导的人脐血CD34+细胞迁移。结果1.经X线照射后骨髓基质细胞培养上清中HMGB1含量增高:人骨髓基质细胞,加速器照射(12Gy)后,培养上清中HMGB1含量为(4.3±0.9)ng/ml,较不照射组HMGB1含量(0.4±0.2)ng/ml升高(p<0.01)。2.HMGB1表面受体检测人脐血CD34+细胞表达HMGB1的受体RAGE(43.1±7.2)%、TLR2(36.1±6.6)%和TLR4(23.1±5.2)%。3.HMGB1促进CD34+细胞向红系和粒单系增殖分化:脐血分选富集的纯度为(98.25±0.93)%,与HMGB1体外液体共培养6天后,和对照组比较,红系(CD71)和粒单系(CD13、CD14、CD11c)标记的表达明显增强,分别为CD13(18.4±3.8 vs 32.6±5.9)%、CD14(12.6±2.7 vs 25.4±4.4)%、CD11c(9.8±2.1 vs 20.3±3.9)%、、CD71(26.6±4.6 vs 47.1±7.4)%,而巨核系标记CD41(1.1±0.4% vs 1.3±0.5%)的表达无明显变化。同样,克隆形成实验示共培养14天后,红系集落、粒-巨噬细胞集落和总集落的生成较对照组明显增多(p<0.05)。4.HMGB1诱导脐血CD34+细胞的迁移:HMGB1在一定的浓度范围内随浓度递增其对人脐血CD34+细胞的迁移作用逐渐增强,当HMGB1浓度为100 ng/ml时,趋化活性最强,趋化指数为3.96±0.46,与对照组比较差异显著(p<0.01),抗-RAGE抗体可部分抑制HMGB1对脐血CD34+细胞的迁移作用。结论照射后骨髓基质细胞培养上清HMGB1含量明显升高;HMGB1可促进人脐血CD34+细胞向粒单核及红系分化,并促进红系集落和粒-巨噬细胞集落的生成;一定浓度的HMGB1可加强脐血CD34+细胞迁移功能,此作用有可能通过RAGE介导。