论文部分内容阅读
目的：CXC趋化因子在炎症反应、血管形成、肿瘤细胞的侵袭和转移等过程中发挥重要作用，其中IL-8通过与其受体CXCR1和CXCR2结合，可发挥对中性粒细胞、T细胞等多种炎症细胞的趋化作用，并有研究发现IL-8在多种肿瘤细胞过表达，参与肿瘤的血管生成、侵袭和转移等过程。G31P是我们通过基因定点突变方法构建得到的一种可与CXCR1/CXCR2高亲和力结合但无趋化活性的CXCL8衍生物，可阻断包括IL-8在内的多种趋化因子与CXCR1/CXCR2的结合，从而发挥抗炎和抗肿瘤作用。顺铂（Cisplatin，DDP）是一种细胞周期非特异性抗肿瘤药物，可抑制癌细胞DNA复制和转录，干扰蛋白质代谢，损伤细胞膜结构，临床上广泛用于治疗多种实体瘤。顺铂的抗肿瘤作用呈剂量依赖性，但使用高剂量追求治疗效果的同时也会导致更严重的毒副作用，其中以顺铂导致的肾毒性最为严重。本实验通过顺铂与G31P的联合用药，研究联合用药对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用，并探讨G31P对顺铂导致肾损伤的影响，为肿瘤的临床治疗提供新的思路。方法：体外实验：采用MTT法研究G31P联合DDP对H22细胞体外增殖的影响。体内实验：动物模型建立：BALB/C小鼠背部皮下接种1×106H22细胞，于接种肿瘤第7天，小鼠随机分为4组，包括DDP+G31P组、DDP组、G31P组和肿瘤对照（Control）组，每组15只。DDP+G31P组小鼠和G31P组小鼠背部皮下隔天注射G31P500μg/kg，其余各组同时注射等量生理盐水。DDP组和DDP+G31P组小鼠单次腹腔注射顺铂12.5mg/kg，其余各组同时注射等量生理盐水。标本处理：用药第5天，每组处死小鼠5只，剥离双侧肾脏，分别病理学检测、测定MPO活力、RT-PCR测定炎症细胞因子表达；用药第9天，处死剩余小鼠，每组10只。剥离实体瘤，称重并计算抑瘤率。肿瘤标本经处理后，分别病理学检测、蛋白免疫印迹法和免疫组织化学法检测肿瘤相关蛋白表达。结果：（1）体外实验MTT显示，G31P单独应用对H22细胞没有明显抑制作用，但与低浓度DDP联合应用，可提高其抑制肿瘤作用，而对中、高浓度的DDP抑制肿瘤作用无影响。（2）体内实验研究显示，G31P联合顺铂可明显抑制肿瘤生长，G31P+DDP组肿瘤平均质量0.21±0.09g，明显小于肿瘤组（1.06±0.51g）（p<0.01),小于单独应用DDP组（0.57±0.21g）（p<0.05)和单独应用G31P组（0.56±0.20g）（p<0.05)；G31P组、DDP组和G31P+DDP组的抑瘤率分别为46.07%±0.19、45.91%±0.19和80.19%±0.08；DDP+G31P组给药后肿瘤体积增长缓慢，显著低于对照组（p<0.01)。（3）肿瘤组织病理学结果发现，DDP+G31P组肿瘤组织的大部分肿瘤细胞坏死，细胞核碎裂。（4）蛋白免疫印迹法显示，相对于肿瘤对照组，G31P联合顺铂可明显抑制肿瘤组织EGFR（p<0.01)、MMP-2（p<0.01)和VEGF（p<0.01)的表达；免疫组织化学染色法显示，G31P联合顺铂可明显抑制肿瘤组织EGFR、VEGF和NF-кB的表达。（5）G31P可缓解大剂量DDP所致肾衰竭，提高小鼠生存率。（6）小鼠肾组织形态学检测发现G31P可减轻DDP所致的肾结构损伤。（7）相对于单独应用DDP组，G31P联合DDP可减少肾脏中性粒细胞的浸润，并可降低肾组织TNF-α（p<0.01)和MIP-2（p<0.01)的表达。结论：（1）G31P联合顺铂应用能明显抑制小鼠肝癌细胞的生长，可抑制肿瘤组织EGFR、VEGF-A、NF-κB和MMP-2的表达，联合用药组抗肿瘤效果强于单独应用顺铂组和单独应用G31P组。（2）G31P可以减轻顺铂导致的肾毒性，相比单独应用顺铂，G31P联合顺铂可减轻肾脏病理损伤，减少肾脏中性粒细胞浸润，减少TNF-α和MIP-2的表达，提高小鼠生存率和生命质量。