集落刺激因子-1受体过表达对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响及机制研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aixiaowen
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目的研究过表达集落刺激因子-1受体(colony stimulating factor-1,CSF-1R)对人鼻咽癌6-10B细胞裸鼠移植瘤生长的影响及可能的机制。方法以课题组前期筛选出的CSF-1R低表达的人鼻咽6-10B细胞为载体,构建CSF-1R过表达慢病毒及空载体阴性对照慢病毒转染至人鼻咽癌6-10B细胞。将过表达CSF-1R的6-10B细胞(实验组transfection)、空载体6-10B细胞(阴性对照组NC)及6-10B细胞(空白对照组mock)种植于裸鼠皮下,观察裸鼠移植瘤生长情况,每3天测量移植瘤长径与短径,计算体积,绘制瘤体的生长曲线,观察过表达CSF-1R对人鼻咽癌6-10B细胞裸鼠移植瘤生长的影响。建模成功后第3周,处死全部裸鼠,剥离肿瘤组织标本,称重并比较移植瘤质量。HE染色观察移植瘤的病理情况,免疫组织化学染色、RT-qPCR、Western blot检测移植瘤中CSF-1R表达的变化情况。采用Western Blot技术检测移植瘤组织中增殖相关因子、侵袭相关因子、凋亡相关因子、自噬相关因子及相关通路蛋白的表达水平,探讨CSF-1R影响肿瘤生长的可能机制。结果成功转染CSF-1R过表达慢病毒至6-10B细胞,并构建三组鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,肿瘤生长曲线显示CSF-1R过表达转染实验组(transfection组)移植瘤生长明显快于阴性对照组(NC组)及空白对照组(mock组),差异有统计学意义(P<0.05)。3周后实验结束时,与NC组及mock组移植瘤相比,transfection组裸鼠移植瘤体积与质量均显著增大,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,三组移植瘤组织具有明显的癌细胞坏死现象。免疫组化结果显示,CSF-1R在NC组及mock组中表达均呈弱阳性,在transfection组中表达呈强阳性。Westernblot结果显示CSF-1R蛋白在transfection组相对表达量高于NC组及mock组,差异有统计学意义(P<0.001),RT-qPCR结果显示transfection组中CSF-1R mRNA的相对表达量较NC组及mock组高,差异有统计学意义(P<0.001),但在NC组及mock组之间CSF-1R蛋白质及mRNA的表达均没有统计学差异(P>0.05)。Western blot结果表明,与NC组及mock组相比,transfection组移植瘤组织中增殖相关因子cyclin D1、转移相关因子MMP2、抗凋亡因子Bcl-2、自噬相关因子LC3 II、Beclin 1蛋白相对表达量均有所增加,差异有统计学意义(P<0.05),凋亡相关因子Bax、自噬相关因子P62蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05),NC组与mock组差异无统计学意义(P>0.05)。检测相关通路蛋白结果显示PI3K、AKT、p-AKT、mTOR蛋白均随着CSF-1R的增加而增加,三组差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.过表达CSF-1R可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,增加细胞自噬促进人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长;2.CSF-1R促进鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的机制可能与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。
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