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【目的】探讨利用脂肪间充质干细胞外囊泡(ADSC-EV)辅助脂肪移植,提高移植脂肪体积保留率的可行性及相关机制,并探索利用延迟注射策略进行优化的可能性。【方法】1.取20-40岁女性腹部水动力吸脂所得脂肪颗粒,通过漂洗、酶解消化、贴壁分离法获得脂肪间充质干细胞(ADSC),进行传代培养及鉴定。获取ADSC培养上清液,梯度超高速离心获取ADSC-EV。利用透射电镜、PKH26染色、nanosight、western blot等检测ADSC-EV的理化性质。体外利用ADSC-EV进行人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的成管及划痕实验,探究ADSC-EV的体外促成管效应,以证明其具有促血管形成作用,并利用RNA深度测序分析其可能的机制。2.选取裸鼠皮下人脂肪移植模型(n=16),分为空白组(0.35m L脂肪),EV组(0.35m L脂肪+7μg EV)。于1个月,3个月后取材,测量移植物湿重及体积,HE切片观察脂肪组织形态、组织纤维化及坏死情况,CD31染色计量血管形成数目,CD206染色检测脂肪组织炎症反应情况。3.选取裸鼠皮下脂肪移植模型(n=24),分为空白组(0.35m L脂肪),EV组(0.35m L脂肪+7μg EV),延迟组(移植0.35m L脂肪,待脂肪移植后七天局部注射7μg EV)。于1个月,3个月后取材,测量移植物湿重及体积,HE切片观察脂肪组织形态、组织纤维化及坏死情况,CD31染色计量血管形成数目,CD206染色检测脂肪组织炎症反应情况。【结果】1.成功分离出人ADSC-EV,且研究表明ADSC-EV在体外可被HUVEC摄取并促进HUVEC的迁徙及成管活动。2.对单纯脂肪移植(空白组)及即刻混合ADSC-EV脂肪移植(EV组)比较发现,在注射后1个月,与空白组对比,EV组脂肪移植物体积更大(空白组:0.21±0.02 mm3,EV组:0.29±0.03 mm3;P<0.05);EV组CD31阳性血管数(空白组:5.0±2.0/视野,EV组:16.4±4.0/视野;P<0.05)高于空白组。3个月取材大体观结果显示,空白组移植物体积0.05±0.01 mm3,EV组0.12±0.03mm3,EV组移植物体积保留率高于空白组(P<0.05);CD31免疫组化血管计数结果显示,空白组血管数为9.8±1.7/视野,EV组血管数为20.0±4.9/视野,EV组移植物内血管密度高于空白组(P<0.05);除此以外,EV组移植物纤维化组织及坏死空洞较少。3.对单纯脂肪移植(空白组)、即刻混合ADSC-EV脂肪移植(EV组)及脂肪移植后一周延迟注射ADSC-EV(Delay-EV组)进行比较。1个月后取材进行检测,与空白组和EV组对比,Delay-EV组脂肪移植物体积更大(空白组:0.18±0.03 mm3,EV组:0.23±0.02 mm3,Delay-EV组:0.27±0.03 mm3;P<0.05);CD31阳性血管数(空白组:6.4±1.7/视野,EV组:14.4±4.8/视野,Delay-EV组:20.6±2.5/视野;P<0.05),3个月取材大体观结果显示,空白组移植物体积:0.06±0.01 mm3,EV组:0.09±0.01 mm3,Delay-EV组:0.11±0.02 mm3,Delay-EV组移植物体积保留率高于空白组及EV组(P<0.05);CD31免疫组化血管计数结果显示,空白组血管数为17.4±2.6/视野,EV组血管数为24.2±4.0/视野,Delay-EV组:31±4.6/视野;Delay-EV组内移植物血管密度高于空白组及EV组(P<0.05);此外,Delay-EV组移植物纤维化组织及空洞较少,所含M2型巨噬细胞较多。【结论】1.ADSC-EV可通过促进血管形成,调节局部炎症反应以提高脂肪移植物体积保留率。2.延迟注射(1周)ADSC-EV相比直接混合ADSC-EV(即刻)进行脂肪移植可进一步提高脂肪移植物体积保留率,优化移植效率。