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肥胖,如今越来越影响人类的健康,已经成为世界范围内影响人类生活质量的疾病之一.患有肥胖症的人,多数伴有多种并发症,如糖尿病、动脉粥样硬化、心血管疾病等,引起人们的重视.所以,研究肥胖的发病机制,寻找治疗肥胖的切入点,成为如今科研领域乃至医疗领域亟待解决的问题. 脂肪细胞的分化对于脂肪的积累过程无疑起到了促进作用,针对脂肪细胞分化的研究也渐趋成为研究肥胖发生的热点之一.在体外,用药物将3T3-L1前脂肪细胞诱导成脂肪细胞,模拟体内脂肪细胞分化的过程,该模型的建立为众多研究肥胖发生的研究者提供了良好的平台. 如今,针对3T3-L1的分化机制,很多关键基因及重要因子的作用已逐渐明朗化.比如,过氧化物酶体增殖物激活受γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ，PPARγ)和CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP:CCAAT/enhancerbinding protein alpha，C/EBP)二者已被认为是控制脂肪细胞分化的关键因子.近年来,Wnt/β-catenin信号通路在脂肪细胞的分化中的抑制作用也被众多研究所证实.而chemerin作为新近发现的脂肪因子,其在脂肪细胞分化中的表达变化已成为人们近来关注的焦点.对于脂肪细胞的分化,越来越多的研究已经从单基因、多基因甚至是多因子相互作用倾向于信号通路之间的对话的探索,而Wnt/β-catenin信号通路与chemerin及其受体之间是否也存在一定的关系,目前尚未有任何报道. 本论文就这两方面展开研究,通过LiCl激动Wnt/β-catenin信号通路的表达,在3T3-L1脂肪细胞的分化过程中,利用RT-PCR技术检测了chemerin的表达变化,以及LiCl的梯度浓度干预实验.结果显示: 1)利用激素“鸡尾酒”法诱导3T3-L1前脂肪细胞,经油红O染色观察其诱导率已达85％～90％,成功地建立了脂肪分化模型,为后续实验奠定了基础. 2)LiCl干预浓度的摸索实验,其中10mM的浓度还不能够完全抑制细胞的分化;而20mM的浓度较好的抑制了脂肪细胞的分化,完全激活了Wnt/β-catenin信号通路的表达,故后续实验采用20mM LiCl. 3)利用20mM LiCl在3T3-L1细胞分化过程中孵育,油红O结果显示:非干预组着色脂滴于Day3开始出现,随着分化进程越来越多,至Day14时达到最大值.而干预组着色脂滴只在Day14时稍有一点. 4)利用20mM LiCl在3T3-L1细胞分化过程中孵育,RT-PCR结果显示:非干预组chemerin的RNA水平在Day0至Day1时下调,其后随着分化进程逐渐上调,而干预组chemerin虽也呈现相似的趋势,但其表达在很大程度上被抑制. 5)在3T3-L1细胞分化成熟之后,LiCl梯度浓度干预24小时,分别设置了0、100uM、1mM、5mM、10mM、20mM六个梯度浓度,结果显示:即使在成熟脂肪细胞中,LiCl仍旧可对chemerin的RNA表达有所抑制,并且抑制效应随LiCl浓度的增大趋于明显.但效果明显不如前期干预. 以上结果表示,LiCl干预对于chemerin的表达存在一定的抑制作用,这种抑制作用表现在两方面:一是在3T3-L1细胞分化过程中添加LiCl,对chemerin具有显著抑制作用;二是在3T3-L1细胞分化成熟时LiCl孵育24小时,对chemerin的抑制效果存在但不是很明显.本实验结果显示,Wnt/β-catenin信号通路可能对chemerin的表达存在直接的或者间接的作用,还有待进一步的研究,为进一步探讨脂肪细胞的分化机制提供了新方向.