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鲽形目鱼类在生长发育过程中,要经历个特殊的变态过程,两侧眼睛移动到同侧,生活方式由浮游生活变为底栖生活,有些种类还伴随头部冠状幼鳍的消失。研究表明鲽形目鱼类变态是受甲状腺激素所调控的,而甲状腺激素的生物学效应是由甲状腺激素受体(Thyroid hormone receptors, TRs)介导的。因此,为了深入探究鲽形目鱼类的变态机制,对甲状腺激素受体的研究是必不可少的。半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是种典型的鲽形目鱼类,在早期发育过程中也经历个变态过程。本研究通过RACE技术、实时荧光定量PCR技术和整体原位杂交技术对半滑舌鳎TRαA和TRβ基因全长序列,在变态过程中的表达情况等进行了初步研究,结果如下:1.为研究甲状腺激素对仔鱼变态的促进作用,分别用甲状腺激素(T4)和甲状腺激素合成抑制剂硫脲(TU)处理变态前仔鱼。发现甲状腺激素处理组仔鱼比对照组提前2天变态,硫脲处理组仔鱼则直未发生变态。说明甲状腺激素对半滑舌鳎的变态发育有诱导的作用。2.利用RACE技术成功克隆了半滑舌鳎TRαA基因,其全长为1883bp,开放阅读框(ORF)长1251bp,5′-UTR和3′-UTR分别长144bp和488bp,编码416个氨基酸,蛋白重量47.43kD。蛋白结构分析其具有甲状腺激素家族特有结构,如NTSS、P盒、D盒等。进化分析显示TRαA基因在硬骨鱼类、哺乳动物、两栖类和鸟类中都有很高的同源性,说明其可能在进化过程中具有较高的保守性。3.实时荧光定量PCR结果显示,TRαA基因在不同组织中(心、肝、鳃、肾、肠、脑、脾、肌肉和性腺)都有表达,且其在脑中的表达量显著高于其它组织(P<0.05)。推测TRαA基因对半滑舌鳎的生长发育具有生物多样性功能,尤其对脑组织的发育有重要的作用。在变态过程中,TRαA基因的转录水平发生了剧烈的变化。随着变态开始转录水平迅速上升,在变态高峰期达到峰值,变态结束后,表达量又下降到较低的水平。这表明TRαA基因可能对半滑舌鳎的变态起到定的调控作用。用RT-PCR检测处理组TRαA基因表达的变化情况,发现药物处理六天后硫脲处理组仔鱼TRαA基因的转录水平显著高于另外两个组。这个结果说明半滑舌鳎仔鱼可能通过使更多的TRaA基因表达,来应对低浓度的甲状腺激素环境,使仔鱼能够继续正常的变态。4.通过RACE方法成功克隆了TRβ基因全长,其全长2345bp,开放阅读框ORF)长1188bp,5′-UTR和3′-UTR分别长454bp和703bp。基因编码区编码396个氨基酸,蛋白重量45.4KD。蛋白序列除具有核受体家族的特征结构外,在铰链区发现了段由9个氨基酸残基组成的插入序列(170-178),此段插入为硬骨鱼类TRβ特有。进化分析显示,TRβ氨基酸序列与TRαA被明确的分为两簇,说明它们是由不同的基因编码的。TRβ与其他硬骨鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类也具有较高同源性,均在85%以上。5.通过分析TRβ基因在半滑舌鳎成鱼各组织的表达情况发现其在各组织中都有表达,但在肝中的表达量显著高于其他组织。我们推测,TRβ基因在半滑舌鳎成鱼各组织中具有多样性的功能,而且其在肝脏的新陈代谢中起到重要的调节作用。在半滑舌鳎仔鱼开始变态时,TRβ基因的表达量会出现迅速的上升,并在变态高峰期达到峰值。正常变态和提前变态的仔鱼TRβ基因的表达水平均随变态开始而迅速上调,而变态被抑制的仔鱼中TRβ基因的表达量则未出现显著变化。这说明TRβ基因在半滑舌鳎仔鱼变态中起到较关键的调控作用。6.通过整体原位杂交试验,我们发现半滑舌鳎仔鱼在变态时尾部存在个缩短的过程,并且TRαA基因在整个尾部变态的过程中均有表达。我们推测,半滑舌鳎尾部缩短是由甲状腺激素诱导的,并且TRαA在这个过程中起到比较重要的调控作用。我们的研究探讨TRs与半滑舌鳎变态的相关性,并为深入解析半滑舌鳎变态的分子机制提供理论依据和参考。