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目的:研究小豆蔻明对多发性骨髓瘤细胞活性、增殖、凋亡、周期及其血管新生的作用并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测天然药物对骨髓瘤细胞活性的影响;采用CCK-8法验证小豆蔻明对骨髓瘤细胞活性的作用;采用CCK-8法检测小豆蔻明对正常人单个核细胞(PBMNCs)活性的影响;采用EdU法检测小豆蔻明对骨髓瘤细胞增殖的影响;采用碘化丙啶(PI)单染法流式细胞术检测小豆蔻明对骨髓瘤细胞周期的影响;采用Annexin V FITC/PI双染法流式细胞术检测小豆蔻明对骨髓瘤细胞凋亡的影响;采用吖啶橙(AO)、溴乙锭(EB)双染荧光显微镜观察小豆蔻明对骨髓瘤细胞凋亡形态的影响;采用Western blot检测小豆蔻明对骨髓瘤细胞caspase-3和PARP活化的影响;采用小管形成试验观察小豆蔻明对血管新生的影响。结果:在筛选的4种天然药物中,小豆蔻明可以抑制骨髓瘤细胞的活性;CCK-8实验也证实小豆蔻明可以呈时间和剂量依赖性抑制骨髓瘤细胞活性,小豆蔻明对RPMI 8226、U266、ARH-773种骨髓瘤细胞48h IC50分别为14.69、13.06、10.82μM;而小豆蔻明对正常人PBMNCs的活性影响较小,只有在高达200μM浓度时,才对PBMNCs显示出一定的毒性作用;EdU试验显示小豆蔻明可以明显抑制骨髓瘤细胞增殖;流式细胞术检测发现,小豆蔻明可以将骨髓瘤细胞阻滞在G2/M期,同时可以显著诱导骨髓瘤细胞凋亡;AO/EB试验证实了小豆蔻明可以诱导骨髓瘤细胞凋亡;Western blot检测发现,小豆蔻明可以诱导骨髓瘤细胞caspase-3和PARP活化;小管形成试验显示小豆蔻明可以抑制血管新生。结论:小豆蔻明显示出抗骨髓瘤多重效应,包括抑制骨髓瘤细胞活性与增殖、阻滞细胞周期、诱导凋亡、抑制血管新生等。小豆蔻明诱导凋亡与caspase激酶活化有关。小豆蔻明抗骨髓瘤值得进一步深入研究。目的:研究小豆蔻明对多发性骨髓瘤细胞NF-κB通路的调控机制。方法:采用Western blot检测小豆蔻明对骨髓瘤细胞NF-κB活化的影响;采用免疫荧光试验检测小豆蔻明对骨髓瘤细胞NF-κB亚细胞定位的影响;采用Western blot检测小豆蔻明对骨髓瘤细胞NF-κB上游IκBα活化、IKKα与IKKβ表达、AKT活化的作用,研究小豆蔻明对骨髓瘤细胞NF-κB下游抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、survivin、XIAP、cIAP-1、cIAP-2以及迁移相关蛋白ICAM-1、增殖相关蛋白COX-2和血管新生相关蛋白VEGF表达的影响;采用CCK-8法观察小豆蔻明联合长春新碱或地塞米松对骨髓瘤细胞活性的影响。结果:小豆蔻明可以呈时间依赖性和剂量依赖性抑制骨髓瘤细胞NF-κB亚基p65磷酸化;免疫荧光试验显示小豆蔻明可以抑制骨髓瘤细胞NF-κB核转位;Western blot结果显示小豆蔻明可以下调NF-κB上游IκBα磷酸化水平,呈时间和剂量依赖性抑制IKKα与IKKβ表达,下调AKT活化水平。而且,小豆蔻明可以呈时间依赖性抑制NF-κB下游一系列基因产物的表达,包括抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、survivin、XIAP、cIAP-1、cIAP-2以及迁移相关蛋白ICAM-1、增殖相关蛋白COX-2和血管新生相关蛋白VEGF。CCK-8试验显示小豆蔻明可以明显提高长春新碱和地塞米松对骨髓瘤细胞活性的抑制作用。结论:小豆蔻明通过下调NF-κB上游AKT活化、IKKα与IKKβ表达、IκBα活化,从而抑制NF-κB活化,并进一步抑制NF-κB下游与骨髓瘤发病相关蛋白的表达,这可能是小豆蔻明抗骨髓瘤多重效应的分子机制之一。目的:研究小豆蔻明对多发性骨髓瘤细胞STAT3通路的调控机制。方法:采用ELISA试验检测小豆蔻明对骨髓瘤细胞IL-6分泌的影响;采用Western blot检测小豆蔻明对骨髓瘤细胞STAT3固有性活化的作用;采用免疫荧光试验观察小豆蔻明对骨髓瘤细胞STAT3亚细胞定位的影响;采用IL-6刺激RPMI 8226细胞后,Western blot检测小豆蔻明对IL-6诱导的STAT3活化的影响,以及小豆蔻明对IL-6诱导的活化的影响;采用Western blot检测小豆蔻明对骨髓瘤细胞STAT3下游基因产物cyclin D1、Bcl-2、VEGF表达的影响。结果:小豆蔻明呈时间依赖性抑制U266细胞IL-6的分泌;Western blot显示小豆蔻明可以呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞STAT3固有性的活化;免疫荧光试验显示小豆蔻明可以抑制U266细胞STAT3核转位;Western blot试验发现IL-6可以诱导RPMI 8226细胞STAT3活化,而小豆蔻明可以阻断由IL-6所诱导的STAT3活化;并且小豆蔻明可以抑制骨髓瘤细胞STAT3下游基因产物cyclin D1、Bcl-2、VEGF表达。结论:小豆蔻明可以下调IL-6的表达,阻断固有性和IL-6诱导性STAT3活化,以及抑制STAT3下游基因产物的表达,这可能是小豆蔻明抗骨髓瘤多重效应的另一重要分子机制。