【摘 要】
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目的:制备人IgGγ链(重链)单克隆抗体及其杂交瘤细胞,并对其研究和鉴定。将其应用于人源抗体的扩大培养,分离纯化以及生物制品质量控制中,建立起一种方便,快速,特异性强,重复
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目的:制备人IgGγ链(重链)单克隆抗体及其杂交瘤细胞,并对其研究和鉴定。将其应用于人源抗体的扩大培养,分离纯化以及生物制品质量控制中,建立起一种方便,快速,特异性强,重复性好的定量检测方法。 方法:分离纯化人血清中的IgG以最佳免疫途径免疫雌性Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0在融合剂聚乙二醇(PEG,MW4000)作用下融合,筛选并建立人IgGγ链单克隆抗体(McAb 612)杂交瘤细胞株(MKIG12)。以人IgGγ链(重链)单克隆抗体包被酶标板,以辣根过氧化物酶标记人IgGγ链(重链)单克隆抗体为已知抗体兼显色抗体,建立了检测人源抗体的双抗夹心ELISA法。 结果:经SDS-PAGE证实纯化人IgG由轻链26.44 KD(1链24KD,κ型和λ型)和重链52.73 KD(h链即γ链,50～55KD)两亚单位组成。杂交瘤MKIG12经鉴定,具有以下特征:①杂交瘤MKIG12连续传代120d,抗体分泌稳定:②染色体数目较多(100条),
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