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越来越多的证据表明,干细胞在骨肉瘤的发生发展中扮演重要角色。microRNA-335(miR-335)被证实参与调控众多肿瘤的进展。本文旨在探讨miR-335与骨肉瘤干细胞之间的关系。我们首先利用三种不同的方法筛选出骨肉瘤干细胞:悬浮成球法、CD117Stro-1表面标记法和耐药法。在三种方法筛选出的骨肉瘤干细胞中均发现miR-335表达量明显低于骨肉瘤细胞。通过特定探针技术,我们分选出了 miR-335高表达和miR-335低表达的骨肉瘤细胞。高表达miR-335的骨肉瘤细胞展现出较低的干细胞特性,较低的悬浮成球比例,CD117/Stro-1双阳性细胞比例以及干细胞相关基因的表达。通过上调或下调功能实验证实,上调miR-335表达的骨肉瘤细胞侵袭能力(干细胞的特性之一)明显降低,而下调miR-335表达的骨肉瘤细胞侵袭能力明显升高。利用Target Scan软件搜索miR-335的靶基因,我们发现POU5F1 3’UTR和miR-335的结合序列。通过荧光素酶转染实验证实,miR-335在转录后水平调控POU5F1。随后,我们对miR-335是否能影响传统化疗药作用进行探究,发现pre-miR-335增强化疗药物对骨肉瘤细胞的毒性作用,而anti-miR-335明显加强了骨肉瘤细胞的耐药性。最后,我们进行动物实验对这一效果进行验证,将裸鼠分为4组:空白对照组、顺铂单处理组、pre-miR-335单处理组和pre-miR-335联合顺铂处理组。发现pre-miR-335联合顺铂在减少肿瘤体积上明显优于其他组。将四组瘤体细胞进行悬浮成球实验发现,pre-miR-335联合顺铂处理的骨肉瘤细胞干细胞特性明显低于顺铂单处理组。综上所述,我们发现miR-335通过作用于POU5F1负性调节骨肉瘤干细胞特性。在临床工作中,miR-335将有希望联合传统化疗药物对骨肉瘤患者进行治疗。