免疫分析方法具有灵敏度高、特异性强的特点,可以短时间内检测大量样品,为环境中农兽药残留的快速分析提供了一种可靠的分析方法。本研究以沙丁胺醇和多效唑为研究对象,分别建立了两种药物的间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA)和时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)。以沙丁胺醇琥珀酸酐和多效唑琥珀酸酐作为两种药物的半抗原,采用碳二亚胺法(DCC/NHS体系)分别将半抗原与牛血清蛋白(BSA)偶联得到免疫原,采用碳二亚胺法(EDC/NHS体系)分别将半抗原与卵清白蛋白(OVA)偶联得到包被原,利用紫外光谱分析证明偶联成功。沙丁胺醇的免疫原和包被原的偶联比分别是11:1和7:1,多效唑的免疫原和包被原的偶联比分别是12:1和8:1。用免疫原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,当沙丁胺醇和多效唑的包被原浓度为4 mg/L时,两者的抗体血清的效价分别是4.0×104和6.4×105。通过对ic-ELISA检测体系影响因素(有机溶剂、Na+强度和pH)的优化,得到沙丁胺醇ic-ELISA法的最优条件:甲醇含量为10%,Na+强度为0.2 mol/L,pH为7.5。在最佳工作条件下,对沙丁胺醇ic-ELISA法的灵敏度、特异性和精密度进行研究。该方法的IC50为0.43μg/L,LOD为0.0056μg/L,线性范围为0.04-3.85μg/L。抗体对莱克多巴胺没有明显的交叉,而对盐酸克伦特罗的交叉反应率达到68.7%。在河水和猪尿样品中的平均回收率介于93.98%-107.66%,变异系数介于2.04%-7.43%。同样的对沙丁胺醇TRFIA检测体系进行条件优化,其最优条件分别为:包被原为1.0 mg/L,多克隆抗体稀释40000倍,Eu3+-二抗稀释2000倍,甲醇含量为10%,Na+强度为0.2 mol/L,pH为7.5。该方法的IC50为0.11μg/L,LOD为0.66 ng/L,线性范围是0.004-5.02μg/L。对盐酸克伦特罗的交叉反应是44%,对莱克多巴胺没有明显的交叉反应。在河水和猪尿样品中的平均回收率介于86.98%-106.75%,变异系数介于4.27%-10.0%。相较于ic-ELISA法,沙丁胺醇TRFIA法的灵敏度提高了3.8倍。对多效唑的ic-ELISA检测体系进行条件优化,确定其最优条件:甲醇含量为10%,Na+强度为0.2 mol/L,pH为7.5。在最佳条件下该方法的IC50为21.35μg/L,LOD为0.43μg/L,线性范围是1.86-310.9μg/L。抗体对多效唑结构类似物均没有明显的交叉反应,表明多效唑抗体的特异性很高。在土壤和河水样品中的平均回收率介于89.39%-109.25%,变异系数介于4.24%-7.32%。优化多效唑TRFIA检测体系的条件,其最优条件为:包被原为1.0 mg/L,多克隆抗体稀释80000倍,Eu3+-二抗稀释2000倍,甲醇含量为10%,Na+强度为0.2 mol/L,pH为7.5。最佳条件下该方法的IC50为1.09μg/L,LOD为0.012μg/L,线性范围是0.067-23.05μg/L。对多效唑结构类似物的交叉反应均小于0.011%。在土壤和河水样品中的平均回收率介于96.85%-102.48%,变异系数介于1.07%-6.25%。和ic-ELISA法相比,多效唑TRFIA法的灵敏度有明显的提高,提高了19.6倍。