【摘 要】
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RNAi作用是内源性或外源性的双链RNA(dsRNA)在Dicer酶的作用下形成21-25nt大小的小干扰RNA(siRNA),siRNA在Ago蛋白的作用下,组装到RNA诱导的沉默复合物(RISC)中,从而特异性地
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RNAi作用是内源性或外源性的双链RNA(dsRNA)在Dicer酶的作用下形成21-25nt大小的小干扰RNA(siRNA),siRNA在Ago蛋白的作用下,组装到RNA诱导的沉默复合物(RISC)中,从而特异性地对同源靶标mRNA进行切割消化进而抑制其表达翻译。自这种基于序列特异性dsRNA对特定基因的沉默作用被发现后,就具备用来对昆虫的基因进行下调,进而达到抗虫并使害虫致死的潜能。另外,利用RNAi技术抗虫可以有效抵抗虫害,并且比较安全,更为重要的是昆虫进化不易对其产生抗性,这些优点使得RNAi技术成为新的抗虫策略的首选。在利用RNAi技术进行抗褐飞虱转基因水稻的研究时,首先需要选择效率高的靶标dsRNA,其次需要产生高通量的dsRNA,此外还要确保转基因水稻产生的dsRNA可以在昆虫进食后运输到昆虫体内并发挥RNAi作用。因此本研究中选择了的靶标dsRNA基因有阳离子氨基酸转运蛋白基因Cationic Amino Acid Transporter,己糖转运蛋白基因Hexose Transporter1,核糖体蛋白基因Ribosomal protein L23及Ribosomal protein S3e。研究中针对所选的基因成功构建4个干扰载体,通过农杆菌介导的方法导入到水稻Oryza sativa中,对获得的转基因水稻进行Western blot分析,检测到转基因水稻中草甘膦抗性基因1174成功表达,Northern blot分析表明转基因水稻成功表达dsRNA。此外还对转基因水稻接种褐飞虱,进行抗褐飞虱数据统计检测,但是抗褐飞虱实验数据并未显示出明显的抗性。
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