目的:应用基因芯片研究子宫颈癌相关基因群的表达和功能,探讨基因芯片技术在筛查宫颈癌相关基因中的应用价值。 方法:(1)标本的收集和处理:以 3 例临床手术切除的宫颈鳞癌Ib 期患者的子宫颈癌组织和 3 例子宫肌瘤患者的正常宫颈组织为研究对象,标本切除后立即置于液氮,冻存备用。两种组织标本均经过病理学检查证实。(2)总 RNA 的提取和质量判定:分别提取标本的总RNA,并用 Agilent 仪器进行检测,判定所提取的为高质量的总 RNA。(3)制备探针:将获得的高质量的 mRNA 逆转录标记 cDNA 探针并纯化, 在链合成中掺入荧光素标记的 dUTP,用 CY-3 标记癌组织的mRNA,CY-5 标记正常组织 mRNA。(4)芯片杂交:将获得的两组探针混合后与 H20K2L 型基因表达谱芯片(含有 16000 个人类全长基因的靶点)杂交,盖玻片封片,置于杂交仓内,60℃杂交 15~17 小时。每例标 本 重 复 三 次 。( 5 ) 检 测 与 分 析 : 芯 片 经 严 格 洗 片 后 用AFFYMETRIX428 ARRAY 扫描仪扫描芯片,获得荧光信号图像,用图像处理软件 ImaGene4.2 对每个靶点的 CY-3 和 CY-5 两种荧光信号进行数字化处理,用管家基因对 cy-3 和 cy-5 信号值进行校正。以荧光信号值相差两倍定为判断基因表达差异的标准,获得两种组织中差异表达的基因信息。取 9 次杂交中共同出现的差异表达的基因为观察结果。 结果:3 例标本中宫颈癌组织与正常组织差异表达的的基因,平均分别为 616、567、522 条;这些基因中大多数为下调基因,少数为上调基因。表达上调的基因主要涉及癌基因、细胞凋亡抑制基因、肿瘤