禽胰多肽及其受体的免疫组化研究

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禽胰多肽(avian pancreatic polypeptide , APP)是胰脏胰多肽细胞分泌的一种多肽。大量实验研究表明:禽胰多肽具有促进畜禽采食、加快生长发育、调节胃肠道运动、影响内分泌活动等生理作用。本实验进行了以下几方面的研究:①以Ca3(PO4)2 沉淀法获得自制的APP 粗品,经sephadex-G50 柱层析将其纯化。②用超离心法分离并纯化鸡小脑APP 受体,SDS-PAGE 检测受体纯度。③以高纯度鸡小脑APP 受体作为抗原免疫家兔,获得兔抗APP 受体多克隆抗体(一抗)。经DOT-ELISA 检测,抗体效价达1:640。琼脂扩散实验鉴定其无异质血清抗体。④一抗血清经硫酸铵盐析,sephadex-G50 和DEAE-32 柱层析获得一抗血清IgG,SDS-PAGE 检测IgG 纯度。在上述研究工作基础上,继续动物试验:选用182 只AA 型肉鸡被随机分为7 组,每组26 只,其中I、II、III、Ⅳ试验组分别以0.50、1.10、2.20、4.40mg/只.天的量饲饮经Ca3(PO4)2 沉淀法自制的APP 粗品,Ⅴ、Ⅵ试验组分别以14、28ug/只.天注射经Ca3(PO4)2 沉淀法自制的APP 粗品,Ⅷ组设为对照。分别于实验后第14、28、42 天每组抽取4 只宰杀,立即收集各组心、肝、脾、肾、胰、小脑、十二指肠前,中,后三段组织进行石蜡包埋,切片,用免疫组化SABC 法进行显色。结果表明:各组心、肝、肾、胰、脾、小脑、十二指肠前,中,后三段组织均有阳性染色,证明以上组织存在禽胰多肽受体。图象统计软件分析结果表明:试验组和对照组之间禽胰多肽受体的表达量无显著性差异。但不同日龄组的禽胰多肽受体的表达量差异显著。以上实验结果为进一步探索禽胰多肽的生理功能提供了基础。
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