目的：　　 1．分析MXC及其代谢产物HPTE是否可以通过抑制3β-HSD与17β-HSD3而影响人与大鼠睾丸中雄激素的合成，并分析抑制作用的发生机制。　　 2．建立同时测定大鼠血浆中MXC及其代谢产物HPTE浓度的HPLC方法。　　 3．用建立的方法研究MXC及HPTE在大鼠体内的毒物代谢动力学。　　 方法：　　 （一）MXC和HPTE对人与大鼠睾丸中3β-HSD及17β-HSD3抑制作用的研究实验　　 用CO2窒息法处死大鼠，取出睾丸，用玻璃匀浆器进行匀浆，制备微粒体，以Bio-Rad蛋白测定试剂盒测定总蛋白浓度。（人睾丸微粒体为成品）。　　 1．在睾丸微粒体蛋白，NAD+，底物（[3H]-PREG和无标记PREG的混合物）等物质的配比浓度都不变的情况下加入不同浓度的MXC或HPTE进行反应以测定MXC或HPTE对3β-HSD的半数抑制浓度；在睾丸微粒体蛋白，NADPH，底物（[3H]-DIONE和无标记DIONE的混合物）等物质的配比浓度都不变的情况下加入不同浓度的MXC或HPTE进行反应以测定MXC或HPTE对17β-HSD3的半数抑制浓度。　　 2．在睾丸微粒体蛋白，NAD+，MXC或HPTE等物质的配比浓度都不变的情况下加入不同浓度的底物（[3H]-PREG和无标记PREG的混合物）进行反应，以测定MXC或HPTE对3β-HSD的抑制模式；在睾丸微粒体蛋白，NADPH，MXC或HPTE等物质的配比浓度都不变的情况下加入不同浓度的底物（[3H]-DIONE和无标记DIONE的混合物）进行反应，以测定MXC或HPTE对17β-HSD3的抑制模式。　　 3．在睾丸微粒体蛋白，底物（[3H]-PREG和无标记PREG的混合物），MXC或HPTE等物质的配比浓度都不变的情况下加入不同浓度的NAD+进行反应以确定MXC或HPTE对3β-HSD的抑制模式是否是通过与NAD+竞争而实现；在睾丸微粒体蛋白，底物（[3H]-DIONE和无标记DIONE的混合物），MXC或HPTE等物质的配比浓度都不变的情况下加入不同浓度的NADPH进行反应以确定MXC或HPTE对17β-HSD3的抑制模式是否是通过与NADPH竞争而实现。　　 到反应时间后，加入2ml冰乙醚终止反应，使用薄层色谱分离法分离类固醇，并用放射扫描仪测定放射性，用P4放射性计数与总计数（实验开始时加入的[3H]-PREG的放射性计数）的比，来计算PREG转化为P4的百分率；用T的放射性计数与总计数（实验开始时加入的[3H]-DIONE的放射性计数）的比来计算DIONE转化为T的百分率。　　 （二）建立同时测定大鼠血浆中MXC及其代谢产物HPTE浓度的HPLC方法　　 高效液相色谱仪Agilent1100系列;色谱柱为AgilentZORBAXEclipseXDB-C18(4.6mmx150mm5μm)；流动相为A：H20，B：乙腈；二元梯度洗脱程序：0min时A：B(55:45)，6min时A：B(15:85)，8min时A：B(55:45)，流速1.0ml·min-1;紫外检测波长：240nm;柱温：30℃。　　 （三）MXC及HPTE在大鼠体内的毒物代谢动力学实验　　 取8只雄性SD大鼠，灌胃给药（MXC，500mg·kg-1）染毒后，于不同时间点收集血液样本。采用建立的HPLC法测定大鼠血浆中MXC和HPTE的含量，用DAS2.0程序处理数据，计算毒物代谢动力学参数。　　 结果：　　 （一）MXC和HPTE对人与大鼠睾丸中3β-HSD及17β-HSD3抑制作用的研究实验　　 1．MXC和HPTE对人的3β-HSD有效抑制浓度为10nM。MXC抑制3β-HSD的IC50为53.21±15.52μM（人）和46.15±17.94μM（大鼠），HPTE对其抑制的IC50为8.29±2.49μM（人）和13.82±2.26μM（大鼠）。MXC达到100μM时，对人和大鼠的17β-HSD3活性没有影响。而HPTE抑制17β-HSD3的IC50是12.1±1.9μM（人）和32.0±8.6μM（大鼠）。　　 2．MXC和HPTE对3β-HSD的作用方式并非与底物孕烯醇酮相互竞争，而是与辅酶因子NAD+竞争。HPTE抑制17β-HSD3的作用方式不是与底物雄烯二酮竞争，而是与辅酶因子NADPH相互竞争。　　 （二）同时测定大鼠血浆中MXC及其代谢产物HPTE浓度的HPLC方法　　 血浆中MXC、HPTE和内标物氯硝西泮出峰干净利落，峰形良好，分离完全，无杂质峰干扰。MXC、HPTE和氯硝西泮留时间分别为8.19，4.26和3.34min.MXC在(0.06-12)mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.9998)，HPTE在(0.06-3)mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.9997)。血浆MXC及HPTE的定量下限均为0.06mg·L-1。平均相对回收率跟平均绝对回收率均在85％以上;日内精密度RSD小于5％，日间精密度RSD小于15％，可用于MXC及HPTE的毒动学研究。　　 （三）MXC及HPTE在大鼠体内的毒物代谢动力学实验　　 甲氧滴滴涕的毒动学参数：Cmax为(5.52±1.21)mg·L-1;t1/2α为(4.12±1.21)h:t1/2β为(22.54±6.31)h;AUC(0-t)为(65.97±17.94)mg·h-1·L-1;AUC(0-∞）为(69.06±18.61)mg·h-1·L-1;CL为(7.94±2.31)L·h-1·kg-1;V为(66.16±20.21)L·kg-1。　　 HPTE的毒动学参数：Cmax为(1.32±0.37)mg·L-1;t1/2。为(3.13±0.91)h：t1/2β为(31.12±10.91)h;AUC(0-t)为(14.69±2.99)mg·h·L-1:AUC(0-∞)为(17.23±3.66)mg·h-1·L-1;CL为(30.14±6.09)L·h-1·kg-1;V为(232.55±36.44)L·kg-1。　　 结论：　　 1．MXC的生物活性代谢产物HPTE能直接抑制3β-HSD和17β-HSD3。　　 2．本研究建立的HPLC法快速、简便、灵敏、精密度高，可用于检测大鼠血浆中的MXC及HPTE。　　 3．经灌胃给药染毒，MXC与其代谢产物HPTE的毒物代谢动力学均符合二室模型,HPTE的半衰期长于MXC。